组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2013年
3期
125-128
,共4页
李志勇%王恒湘%毕晓云%黄舒%郭子宽%郭志坤
李誌勇%王恆湘%畢曉雲%黃舒%郭子寬%郭誌坤
리지용%왕항상%필효운%황서%곽자관%곽지곤
间充质干细胞%骨髓%凝固%尿激酶%分离
間充質榦細胞%骨髓%凝固%尿激酶%分離
간충질간세포%골수%응고%뇨격매%분리
Mesenchymal stem cells%Bone marrow%Coagulation%Urokinase%Isolation
目的 探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法.方法 采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组.各组标本经氯化铵溶解红细胞后,分别进行成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和MSC传代培养.计每组CFU-F及第0、1和2代MSC数量.流式细胞仪测定细胞表型,组织化学法检测细胞体外成骨和成脂肪能力.结果 尿激酶处理组样本CFU-F数平均为(33.71±23.54),接近于未凝固对照组样本(40.43±21.29)(n=7,P＞0.05),显著高于机械法处理组(13±11.91)(n=7,P＜0.01)和凝固未处理组(3.71±3.89)(n=7,P＜0.01).储存8或16h后的标本,各组CFU-F形成能力下降,而未凝固对照组和尿激酶处理组数量仍显著高于另外两组(P＜0.05).标本储存不同时间进行MSC传代培养,未凝固对照组及尿激酶处理组细胞数量无明显差别,但均显著高于凝固未处理组及机械处理组.各组MSC均表达CD73和CD90,不表达CD31和CD45.经特异诱导后,各组MSC均呈现碱性磷酸酶活性,细胞内出现亲油红O染料的脂肪滴.结论 对于已经凝固的骨髓标本而言,尿激酶预处理是分离培养MSC的良好途径.
目的 探討一種從骨髓血凝塊中分離培養間充質榦細胞的簡易方法.方法 採集肝素化骨髓標本7份,部分加入凝血酶以模擬血液凝固過程,併于0、8和16 h分彆使用尿激酶或機械處理,分為尿激酶處理組、機械處理組、凝固未處理組及未凝固對照組.各組標本經氯化銨溶解紅細胞後,分彆進行成纖維細胞集落形成單位(CFU-F)和MSC傳代培養.計每組CFU-F及第0、1和2代MSC數量.流式細胞儀測定細胞錶型,組織化學法檢測細胞體外成骨和成脂肪能力.結果 尿激酶處理組樣本CFU-F數平均為(33.71±23.54),接近于未凝固對照組樣本(40.43±21.29)(n=7,P＞0.05),顯著高于機械法處理組(13±11.91)(n=7,P＜0.01)和凝固未處理組(3.71±3.89)(n=7,P＜0.01).儲存8或16h後的標本,各組CFU-F形成能力下降,而未凝固對照組和尿激酶處理組數量仍顯著高于另外兩組(P＜0.05).標本儲存不同時間進行MSC傳代培養,未凝固對照組及尿激酶處理組細胞數量無明顯差彆,但均顯著高于凝固未處理組及機械處理組.各組MSC均錶達CD73和CD90,不錶達CD31和CD45.經特異誘導後,各組MSC均呈現堿性燐痠酶活性,細胞內齣現親油紅O染料的脂肪滴.結論 對于已經凝固的骨髓標本而言,尿激酶預處理是分離培養MSC的良好途徑.
목적 탐토일충종골수혈응괴중분리배양간충질간세포적간역방법.방법 채집간소화골수표본7빈,부분가입응혈매이모의혈액응고과정,병우0、8화16 h분별사용뇨격매혹궤계처리,분위뇨격매처리조、궤계처리조、응고미처리조급미응고대조조.각조표본경록화안용해홍세포후,분별진행성섬유세포집락형성단위(CFU-F)화MSC전대배양.계매조CFU-F급제0、1화2대MSC수량.류식세포의측정세포표형,조직화학법검측세포체외성골화성지방능력.결과 뇨격매처리조양본CFU-F수평균위(33.71±23.54),접근우미응고대조조양본(40.43±21.29)(n=7,P＞0.05),현저고우궤계법처리조(13±11.91)(n=7,P＜0.01)화응고미처리조(3.71±3.89)(n=7,P＜0.01).저존8혹16h후적표본,각조CFU-F형성능력하강,이미응고대조조화뇨격매처리조수량잉현저고우령외량조(P＜0.05).표본저존불동시간진행MSC전대배양,미응고대조조급뇨격매처리조세포수량무명현차별,단균현저고우응고미처리조급궤계처리조.각조MSC균표체CD73화CD90,불표체CD31화CD45.경특이유도후,각조MSC균정현감성린산매활성,세포내출현친유홍O염료적지방적.결론 대우이경응고적골수표본이언,뇨격매예처리시분리배양MSC적량호도경.
