局解手术学杂志
跼解手術學雜誌
국해수술학잡지
JOURNAL OF REGIONAL ANATOMY AND OPERATIVE SURGERY
2013年
4期
349-352
,共4页
颜洪%张琼%吴丹%宋华培
顏洪%張瓊%吳丹%宋華培
안홍%장경%오단%송화배
腺苷酸活化蛋白激酶%原核表达%蛋白纯化
腺苷痠活化蛋白激酶%原覈錶達%蛋白純化
선감산활화단백격매%원핵표체%단백순화
AMP-activated protein kinase(AMPK)%prokaryotic expression%protein purification
目的 构建His-AMPKα1312截短缺失融合蛋白原核表达载体,表达重组AMPKα1 312为深入研究各种病理生理条件对AMPK活化的影响奠定基础.方法 经RT-PCR获得AMPKα1截短基因片段,定向插入原核表达载体PET28a(+),构建重组表达质粒YH2/PET28a(+),转化DH5αE.coli,经IPTG诱导表达及镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化后SDS-PAGE分析及Western blot检测.结果 经测序和PCR证实重组表达质粒YH2/PET28a(+)构建正确.表达的截短缺失蛋白相对分子量约为38 kD,Westernblot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性.结论 已成功构建并纯化了具有生物学活性的AMPKα1312截短缺失蛋白,为深入研究AMPK奠定了基础.
目的 構建His-AMPKα1312截短缺失融閤蛋白原覈錶達載體,錶達重組AMPKα1 312為深入研究各種病理生理條件對AMPK活化的影響奠定基礎.方法 經RT-PCR穫得AMPKα1截短基因片段,定嚮插入原覈錶達載體PET28a(+),構建重組錶達質粒YH2/PET28a(+),轉化DH5αE.coli,經IPTG誘導錶達及鎳瓊脂糖凝膠親和層析純化後SDS-PAGE分析及Western blot檢測.結果 經測序和PCR證實重組錶達質粒YH2/PET28a(+)構建正確.錶達的截短缺失蛋白相對分子量約為38 kD,Westernblot分析錶明,錶達蛋白具有良好的抗原性.結論 已成功構建併純化瞭具有生物學活性的AMPKα1312截短缺失蛋白,為深入研究AMPK奠定瞭基礎.
목적 구건His-AMPKα1312절단결실융합단백원핵표체재체,표체중조AMPKα1 312위심입연구각충병리생리조건대AMPK활화적영향전정기출.방법 경RT-PCR획득AMPKα1절단기인편단,정향삽입원핵표체재체PET28a(+),구건중조표체질립YH2/PET28a(+),전화DH5αE.coli,경IPTG유도표체급얼경지당응효친화층석순화후SDS-PAGE분석급Western blot검측.결과 경측서화PCR증실중조표체질립YH2/PET28a(+)구건정학.표체적절단결실단백상대분자량약위38 kD,Westernblot분석표명,표체단백구유량호적항원성.결론 이성공구건병순화료구유생물학활성적AMPKα1312절단결실단백,위심입연구AMPK전정료기출.
