中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2013年
3期
667-673
,共7页
崔雄鹰%施小凤%黄建松%刘萍%陶岚岚%周玉兰%阮铮%奚晓东
崔雄鷹%施小鳳%黃建鬆%劉萍%陶嵐嵐%週玉蘭%阮錚%奚曉東
최웅응%시소봉%황건송%류평%도람람%주옥란%원쟁%해효동
血小板整合素β3%截短突变%逆转录病毒%转基因小鼠模型%造血干细胞移植
血小闆整閤素β3%截短突變%逆轉錄病毒%轉基因小鼠模型%造血榦細胞移植
혈소판정합소β3%절단돌변%역전록병독%전기인소서모형%조혈간세포이식
platelet integrin β3%truncated mutation%retrovirus%transgenic mouse models%hematopoietic stem cell transplantation
本研究通过逆转录病毒感染整合素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血干细胞再进行骨髓移植建立β3及其胞内段不同截短体的转基因小鼠模型,为进一步研究整合素β3胞内段在血小板双向信号转导途径中的作用提供基础.将整合素β3野生型、β3-△759(缺失R760 GT762氨基酸片段)和β3-△754(缺失T755 NITYRGT7622氨基酸片段)的cDNA分别克隆至带有GFP编码基因的MSCV MigR1逆转录病毒载体质粒中,用质粒转染BOSC23包装细胞株包装出带有β3全长及不同突变体的逆转录病毒,再感染β3-/-供体小鼠骨髓细胞,尾静脉注射移植入经致死剂量辐照的野生型C57BL/6小鼠体内,移植后6-8周流式细胞术检测GFP和β3的表达率以评估转基因效率.结果表明,成功建立了空载(Vector)、β3野生型和截短突变β3-△759、β3-△754等4种小鼠模型,血小板转基因成功的比率(即GFP阳性率)为18％-66％,转基因血小板β3表达可达到β3+/-水平.结论:利用逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立血小板转基因小鼠模型是一种高通量快速有效的建立转基因小鼠模型的方法,这为进一步研究整合素β3胞内不同区段对血小板整合素信号转导途径的影响及体内对血小板进行基因操作和基因治疗奠定了基础.
本研究通過逆轉錄病毒感染整閤素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血榦細胞再進行骨髓移植建立β3及其胞內段不同截短體的轉基因小鼠模型,為進一步研究整閤素β3胞內段在血小闆雙嚮信號轉導途徑中的作用提供基礎.將整閤素β3野生型、β3-△759(缺失R760 GT762氨基痠片段)和β3-△754(缺失T755 NITYRGT7622氨基痠片段)的cDNA分彆剋隆至帶有GFP編碼基因的MSCV MigR1逆轉錄病毒載體質粒中,用質粒轉染BOSC23包裝細胞株包裝齣帶有β3全長及不同突變體的逆轉錄病毒,再感染β3-/-供體小鼠骨髓細胞,尾靜脈註射移植入經緻死劑量輻照的野生型C57BL/6小鼠體內,移植後6-8週流式細胞術檢測GFP和β3的錶達率以評估轉基因效率.結果錶明,成功建立瞭空載(Vector)、β3野生型和截短突變β3-△759、β3-△754等4種小鼠模型,血小闆轉基因成功的比率(即GFP暘性率)為18％-66％,轉基因血小闆β3錶達可達到β3+/-水平.結論:利用逆轉錄病毒感染的造血榦細胞移植建立血小闆轉基因小鼠模型是一種高通量快速有效的建立轉基因小鼠模型的方法,這為進一步研究整閤素β3胞內不同區段對血小闆整閤素信號轉導途徑的影響及體內對血小闆進行基因操作和基因治療奠定瞭基礎.
본연구통과역전록병독감염정합소β3결함소서(β3-/-)골수조혈간세포재진행골수이식건립β3급기포내단불동절단체적전기인소서모형,위진일보연구정합소β3포내단재혈소판쌍향신호전도도경중적작용제공기출.장정합소β3야생형、β3-△759(결실R760 GT762안기산편단)화β3-△754(결실T755 NITYRGT7622안기산편단)적cDNA분별극륭지대유GFP편마기인적MSCV MigR1역전록병독재체질립중,용질립전염BOSC23포장세포주포장출대유β3전장급불동돌변체적역전록병독,재감염β3-/-공체소서골수세포,미정맥주사이식입경치사제량복조적야생형C57BL/6소서체내,이식후6-8주류식세포술검측GFP화β3적표체솔이평고전기인효솔.결과표명,성공건립료공재(Vector)、β3야생형화절단돌변β3-△759、β3-△754등4충소서모형,혈소판전기인성공적비솔(즉GFP양성솔)위18％-66％,전기인혈소판β3표체가체도β3+/-수평.결론:이용역전록병독감염적조혈간세포이식건립혈소판전기인소서모형시일충고통량쾌속유효적건립전기인소서모형적방법,저위진일보연구정합소β3포내불동구단대혈소판정합소신호전도도경적영향급체내대혈소판진행기인조작화기인치료전정료기출.
