CAJ | 학술논문

随着对急性髓系白血病(AML)发生、发展的基因机制深入研究,构建转染效率高且对细胞无毒性作用的载体变得十分重要.为了研究补体C3a的受体蛋白C3aR1(complement component 3a receptor 1)在AML中的作用,构建了携带C3aR1的第三代慢病毒载体Venus.本研究主要观察Venus慢病毒载体在急性髓系白血病中应用的可行性.采用磷酸钙沉淀法将重组载体Venus-C3aR1转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,感染HL-60细胞,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)观察感染效率,用RT-PCR和流式细胞术鉴定感染后HL-60细胞C3aR1的表达情况.用CCK8法绘制细胞生长曲线、观察细胞诱导分化能力来判断慢病毒载体的细胞毒性作用.结果显示,流式细胞仪(FCM)检测慢病毒感染率＞95％,感染后HL-60细胞上C3aR1表达明显增加,病毒包装成功.慢病毒感染前后细胞生长曲线及诱导分化能力无明显变化,说明慢病毒载体不影响HL-60细胞的一般生物学特性,无明显的细胞毒性作用.结论:Venus慢病毒载体对AML细胞株HL-60的感染效率高,能够整合到细胞基因组中实现目的基因的稳定表达.慢病毒感染对细胞无明显的细胞毒性作用,不会干扰靶基因在细胞株中功能,因此慢病毒载体可以为白血病细胞的研究提供可靠的技术支持.
수착대급성수계백혈병(AML)발생、발전적기인궤제심입연구,구건전염효솔고차대세포무독성작용적재체변득십분중요.위료연구보체C3a적수체단백C3aR1(complement component 3a receptor 1)재AML중적작용,구건료휴대C3aR1적제삼대만병독재체Venus.본연구주요관찰Venus만병독재체재급성수계백혈병중응용적가행성.채용린산개침정법장중조재체Venus-C3aR1전염포장세포293T세포,산생만병독과립,감염HL-60세포,통과검측록색형광단백(GFP)관찰감염효솔,용RT-PCR화류식세포술감정감염후HL-60세포C3aR1적표체정황.용CCK8법회제세포생장곡선、관찰세포유도분화능력래판단만병독재체적세포독성작용.결과현시,류식세포의(FCM)검측만병독감염솔＞95％,감염후HL-60세포상C3aR1표체명현증가,병독포장성공.만병독감염전후세포생장곡선급유도분화능력무명현변화,설명만병독재체불영향HL-60세포적일반생물학특성,무명현적세포독성작용.결론:Venus만병독재체대AML세포주HL-60적감염효솔고,능구정합도세포기인조중실현목적기인적은정표체.만병독감염대세포무명현적세포독성작용,불회간우파기인재세포주중공능,인차만병독재체가이위백혈병세포적연구제공가고적기술지지.