靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立
파향AATF기인shRNA표체재체적구건급기은정표체적백혈병U937세포계적건립
Construction of shRNA Expression Vector Targeting AATF and Establishment of Stably Transfected U937 Cells
  • 万方数据
    中国实验血液学杂志 중국실험혈액학잡지
    JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
    2013年 3期 567-570 ,共4页

    吕超%曹江%孟凡静%曾令宇%潘彬%陈翀%吴庆运%宋旭光%李振宇

    려초%조강%맹범정%증령우%반빈%진충%오경운%송욱광%리진우

    AATF%短发夹RNA%白血病%基因表达%载体构建 AATF%短髮夾RNA%白血病%基因錶達%載體構建
    AATF%단발협RNA%백혈병%기인표체%재체구건
    AATF%shRNA%leukemia%gene expression%vector construction
    本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系.根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303 ～ 324、443 ～ 464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系；RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达.结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确.稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P＜0.05).结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础.
    본연구지재구건파향AATF기인적단발협RNA(shRNA)진핵표체재체,획득간우질립은정전염적인백혈병U937세포계.근거GenBank수거고제공적AATF mRNA서렬,이228～249、303 ～ 324、443 ～ 464위서렬작위RNA간우위점,배제동원가능,합성3대호보병편마mRNA기인적특이성shRNA서렬적과핵감산,극륭지경BamHⅠ、HindⅢ쌍매절선성화적pSilencer 3.1인H1계동자간우재체중,이용측서감정소구건적중조재체시부정학,경전천공장3개중조재체(pSA-1、pSA-2、pSA-3)전염인백혈병U937세포계,G418(500 mg/L)유한희석법지속사선8주후,확증획득은정표체적세포계；RT-PCR、Western blot분별검측은정전염세포계적AATF mRNA화AATF단백표체.결과표명,AATF간우서렬급독마광완전정학.은정전염세포AATF mRNA표체하조,AATF단백표체량하강(P＜0.05).결론:성공지구건AATF shRNA진핵표체재체급AATF표체은정억제적백혈병U937세포계,위이AATF기인위파점적인백혈병진일보연구전정료실험기출.
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