中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2013年
3期
550-555
,共6页
邢海燕%贾玉娇%唐克晶%田征%陈一瑞%饶青%王敏%王建祥
邢海燕%賈玉嬌%唐剋晶%田徵%陳一瑞%饒青%王敏%王建祥
형해연%가옥교%당극정%전정%진일서%요청%왕민%왕건상
GATA-2%iASPP%转录调控%荧光素酶活性
GATA-2%iASPP%轉錄調控%熒光素酶活性
GATA-2%iASPP%전록조공%형광소매활성
GATA-2%iASPP%transcription regulation%luciferase activity
癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用.本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用.首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和GATA-2蛋白的表达,然后构建带有GATA-2开放读码框的真核表达载体与带有iASPP转录起始位点上游3000 bp至下游500 bp序列中GATA-2假定结合位点的荧光素酶报告载体,共转染HEK293和CV-1细胞,检测荧光素酶活性,并对荧光素酶活性上调的结合位点区进行染色质免疫共沉淀实验.结果显示,白血病细胞系中iASPP高表达的细胞大多存在GATA-2的高表达；GATA-2对iASPP报告基因荧光素酶活性有显著影响,并呈现明显的“剂量-效应”关系.当pCMV5-GATA2转染剂量上升至100 ng时,iASPP荧光素酶活性在HEK293细胞中上调到2倍；此转录激活作用在CV-1细胞中尤为显著,荧光素酶活性上调可达6.7.染色质免疫共沉淀结果证实GATA-2与iASPP转录起始区nt-361 ～-334有特异性结合.结论:转录因子GATA-2可以与iASPP的转录调控区结合,并促进iASPP基因转录.
癌基因iASPP促進細胞增殖、抑製細胞凋亡,其轉錄起始位點上遊序列有轉錄因子GATA-2的假定結閤位點,GATA-2在造血榦/祖細胞的增殖和分化中起重要作用.本研究旨在探討GATA-2對iASPP的轉錄調控作用.首先檢測瞭部分白血病細胞繫中iASPP和GATA-2蛋白的錶達,然後構建帶有GATA-2開放讀碼框的真覈錶達載體與帶有iASPP轉錄起始位點上遊3000 bp至下遊500 bp序列中GATA-2假定結閤位點的熒光素酶報告載體,共轉染HEK293和CV-1細胞,檢測熒光素酶活性,併對熒光素酶活性上調的結閤位點區進行染色質免疫共沉澱實驗.結果顯示,白血病細胞繫中iASPP高錶達的細胞大多存在GATA-2的高錶達；GATA-2對iASPP報告基因熒光素酶活性有顯著影響,併呈現明顯的“劑量-效應”關繫.噹pCMV5-GATA2轉染劑量上升至100 ng時,iASPP熒光素酶活性在HEK293細胞中上調到2倍；此轉錄激活作用在CV-1細胞中尤為顯著,熒光素酶活性上調可達6.7.染色質免疫共沉澱結果證實GATA-2與iASPP轉錄起始區nt-361 ～-334有特異性結閤.結論:轉錄因子GATA-2可以與iASPP的轉錄調控區結閤,併促進iASPP基因轉錄.
암기인iASPP촉진세포증식、억제세포조망,기전록기시위점상유서렬유전록인자GATA-2적가정결합위점,GATA-2재조혈간/조세포적증식화분화중기중요작용.본연구지재탐토GATA-2대iASPP적전록조공작용.수선검측료부분백혈병세포계중iASPP화GATA-2단백적표체,연후구건대유GATA-2개방독마광적진핵표체재체여대유iASPP전록기시위점상유3000 bp지하유500 bp서렬중GATA-2가정결합위점적형광소매보고재체,공전염HEK293화CV-1세포,검측형광소매활성,병대형광소매활성상조적결합위점구진행염색질면역공침정실험.결과현시,백혈병세포계중iASPP고표체적세포대다존재GATA-2적고표체；GATA-2대iASPP보고기인형광소매활성유현저영향,병정현명현적“제량-효응”관계.당pCMV5-GATA2전염제량상승지100 ng시,iASPP형광소매활성재HEK293세포중상조도2배；차전록격활작용재CV-1세포중우위현저,형광소매활성상조가체6.7.염색질면역공침정결과증실GATA-2여iASPP전록기시구nt-361 ～-334유특이성결합.결론:전록인자GATA-2가이여iASPP적전록조공구결합,병촉진iASPP기인전록.
