CAJ | 학술논문

为了构建用于镜鲤(Cyprinus carpio var.specularis)特定基因组序列染色体定位的实验体系,在细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文库筛选池中对已知短序列基因组片段进行PCR扩增,筛选出包含目标序列的BAC克隆,提取BAC质粒进行缺刻平移标记制备探针,开展荧光原位杂交(Fluorescencein situ hybridization,FISH)实验.通过对染色体片前处理、BAC质粒探针制备、C0t-1 DNA封闭基因组重复序列、预杂交、荧光染料选择、信号放大等一系列实验条件和方法的探索优化,成功实现了目标序列在镜鲤有丝分裂中期染色体上的定位.定位对象既包括在染色体上有单一位点的序列,如斑马鱼微卫星标记Z6884和Z4268,也包括在染色体上有多个位点的重复序列,如黄河鲤性别相关标记CCmfl.来自斑马鱼同一条染色体上的两个微卫星标记被分别定位于镜鲤不同染色体上,为鲤鱼染色体数目加倍的进化假设提供了一项直接实验证据,同时将现有遗传连锁图谱与染色体对应起来,可作为染色体识别和细胞遗传学图谱构建的依据.黄河鲤性别相关重复序列被定位于不少于四条染色体上,为性别决定相关基因的筛查提供了研究线索.这一BAC-FISH实验体系将成为鲤细胞遗传学图谱构建、基因组进化和比较基因组学研究中的重要研究工具.
위료구건용우경리(Cyprinus carpio var.specularis)특정기인조서렬염색체정위적실험체계,재세균인공염색체(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)문고사선지중대이지단서렬기인조편단진행PCR확증,사선출포함목표서렬적BAC극륭,제취BAC질립진행결각평이표기제비탐침,개전형광원위잡교(Fluorescencein situ hybridization,FISH)실험.통과대염색체편전처리、BAC질립탐침제비、C0t-1 DNA봉폐기인조중복서렬、예잡교、형광염료선택、신호방대등일계렬실험조건화방법적탐색우화,성공실현료목표서렬재경리유사분렬중기염색체상적정위.정위대상기포괄재염색체상유단일위점적서렬,여반마어미위성표기Z6884화Z4268,야포괄재염색체상유다개위점적중복서렬,여황하리성별상관표기CCmfl.래자반마어동일조염색체상적량개미위성표기피분별정위우경리불동염색체상,위리어염색체수목가배적진화가설제공료일항직접실험증거,동시장현유유전련쇄도보여염색체대응기래,가작위염색체식별화세포유전학도보구건적의거.황하리성별상관중복서렬피정위우불소우사조염색체상,위성별결정상관기인적사사제공료연구선색.저일BAC-FISH실험체계장성위리세포유전학도보구건、기인조진화화비교기인조학연구중적중요연구공구.