江西农业大学学报
江西農業大學學報
강서농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS
2013年
3期
620-625
,共6页
王自布%齐军仓%李卫华%曹连莆%石培春
王自佈%齊軍倉%李衛華%曹連莆%石培春
왕자포%제군창%리위화%조련보%석배춘
小麦%转基因%实时荧光定量(qRT-PCR)%淀粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)
小麥%轉基因%實時熒光定量(qRT-PCR)%澱粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)
소맥%전기인%실시형광정량(qRT-PCR)%정분분지매기인(SBE-Ⅱb)
wheat (Triticun aestivum L.)%transgene%quantitative real-time PCR (qRT-PCR)%starch branching enzyme gene (SBE Ⅱ b)
从花后15 d的小麦(Triticum aestivum L.)胚乳中提取RNA,根据GeneBank上已经公布的小麦淀粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)序列(AY740401.1)设计引物,经RT-PCR扩增得到一条2 511 bp的条带,测序结果与公布的序列一致.将克隆得到的基因构建到了植物表达载体pPZP35S上,通过农杆菌叶盘转化法转化烟草叶片,经卡那霉素筛选、PCR扩增鉴定证明,SBE-Ⅱb基因已成功转入烟草细胞中,获得4个转基因株系.转基因烟草叶片与野生型比较,颜色变暗,植株较小.RT-PCR半定量和实时荧光定量RT-PCR分析表明,转基因烟草株系的叶片中有SBE-Ⅱb基因的表达,与对照植株相比,转SBE-Ⅱb基因的植株中的转录本达到了显著性的变化,但是其淀粉分支酶活性没有达到显著性变化.
從花後15 d的小麥(Triticum aestivum L.)胚乳中提取RNA,根據GeneBank上已經公佈的小麥澱粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)序列(AY740401.1)設計引物,經RT-PCR擴增得到一條2 511 bp的條帶,測序結果與公佈的序列一緻.將剋隆得到的基因構建到瞭植物錶達載體pPZP35S上,通過農桿菌葉盤轉化法轉化煙草葉片,經卡那黴素篩選、PCR擴增鑒定證明,SBE-Ⅱb基因已成功轉入煙草細胞中,穫得4箇轉基因株繫.轉基因煙草葉片與野生型比較,顏色變暗,植株較小.RT-PCR半定量和實時熒光定量RT-PCR分析錶明,轉基因煙草株繫的葉片中有SBE-Ⅱb基因的錶達,與對照植株相比,轉SBE-Ⅱb基因的植株中的轉錄本達到瞭顯著性的變化,但是其澱粉分支酶活性沒有達到顯著性變化.
종화후15 d적소맥(Triticum aestivum L.)배유중제취RNA,근거GeneBank상이경공포적소맥정분분지매기인(SBE-Ⅱb)서렬(AY740401.1)설계인물,경RT-PCR확증득도일조2 511 bp적조대,측서결과여공포적서렬일치.장극륭득도적기인구건도료식물표체재체pPZP35S상,통과농간균협반전화법전화연초협편,경잡나매소사선、PCR확증감정증명,SBE-Ⅱb기인이성공전입연초세포중,획득4개전기인주계.전기인연초협편여야생형비교,안색변암,식주교소.RT-PCR반정량화실시형광정량RT-PCR분석표명,전기인연초주계적협편중유SBE-Ⅱb기인적표체,여대조식주상비,전SBE-Ⅱb기인적식주중적전록본체도료현저성적변화,단시기정분분지매활성몰유체도현저성변화.
