CAJ | 학술논문

目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用.方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-simple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况.同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用.结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布.过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用.结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础.
목적:구건함유ifitm2기인적중조질립,재인배신HEK293T세포중표체,병험증IFITM2단백적항병독작용.방법:삼조Genbank ifitm2기인서렬,설계상하유인물,통과RT-PCR기술확증ifitm2기인,병장확증산물련접지pMD18-T-simple재체상,목적기인측서정학후진일보아극륭지진핵표체재체pVAX1상,전염HEK293T세포,통과RT-PCR,단백면역인적(Western blot)화격광공취집현미경(LCSM)험증외원기인재세포내적표체정황.동시HEK293T세포과표체IFITM2단백,이용함유EGFP기인적VSV-G가막병독감염세포,통과Western blot검측IFITM2단백대병독적억제작용.결과:성공획득ifitm2기인,측서정학,장기련접도pVAX1재체중,경매절감정,증명함유ifitm2기인적중조질립구건성공,Western blot화LCSM분석표명,목적기인능구재HEK293T세포중표체,차정엄범분포.과표체IFITM2단백후,형광단백분석표명,해단백대병독감염구유일정적억제작용.결론:성공구건료함유ifitm2기인적중조진핵표체질립,해질립가이재진핵세포중득도유효표체,차대VSV-G가막병독구유일정억제작용,해연구위진일보탐토IFITM2단백적항병독작용급기분자궤제제공료실험급이론기출.