安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
11期
4729-4734
,共6页
邱洋松%孙婧%孙爱%邬丹妮%张冰倩%马建辉%徐丽珊%孙梅好
邱洋鬆%孫婧%孫愛%鄔丹妮%張冰倩%馬建輝%徐麗珊%孫梅好
구양송%손청%손애%오단니%장빙천%마건휘%서려산%손매호
硒蛋白%硒代半胱氨酸%生物检测器%茎环结构
硒蛋白%硒代半胱氨痠%生物檢測器%莖環結構
서단백%서대반광안산%생물검측기%경배결구
Selenoprotein%Selenocysteine%Biological detector%Selenocysteine insertion sequence
硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切.硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒.原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,See)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物检测器,进而补充目前常用硒含量测定方法提供了可能.该研究利用原核载体构建硒代半胱氨酸插入所需茎环结构(Selenocysteine insertion sequence,SECIS)及其突变载体,通过氨苄青霉素筛选获得高效、高准确率的SECIS,并以此构建GFP超表达栽体pSEGFP.通过pSEGFP和pSelABC共转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,测定分析发现胞质蛋白的荧光强度与培养基硒酸盐浓度在一定范围内具有较好的线性关系.此结果表明,试验已初步构建了大肠杆菌硒生物检测器,为利用此方法进一步分析测定环境及生物样品中的硒含量奠定了基础.
硒是許多生物的必需微量元素,與人類健康關繫密切.硒在自然界中分佈的不平衡導緻不同地區的硒含量差異較大,易引起硒缺乏或者中毒.原覈生物的硒代半胱氨痠(Selenocysteine,See)及硒蛋白的生物閤成途徑已較為清楚,此為構建硒痠鹽生物檢測器,進而補充目前常用硒含量測定方法提供瞭可能.該研究利用原覈載體構建硒代半胱氨痠插入所需莖環結構(Selenocysteine insertion sequence,SECIS)及其突變載體,通過氨芐青黴素篩選穫得高效、高準確率的SECIS,併以此構建GFP超錶達栽體pSEGFP.通過pSEGFP和pSelABC共轉化大腸桿菌BL21(DE3),併進行IPTG誘導錶達,測定分析髮現胞質蛋白的熒光彊度與培養基硒痠鹽濃度在一定範圍內具有較好的線性關繫.此結果錶明,試驗已初步構建瞭大腸桿菌硒生物檢測器,為利用此方法進一步分析測定環境及生物樣品中的硒含量奠定瞭基礎.
서시허다생물적필수미량원소,여인류건강관계밀절.서재자연계중분포적불평형도치불동지구적서함량차이교대,역인기서결핍혹자중독.원핵생물적서대반광안산(Selenocysteine,See)급서단백적생물합성도경이교위청초,차위구건서산염생물검측기,진이보충목전상용서함량측정방법제공료가능.해연구이용원핵재체구건서대반광안산삽입소수경배결구(Selenocysteine insertion sequence,SECIS)급기돌변재체,통과안변청매소사선획득고효、고준학솔적SECIS,병이차구건GFP초표체재체pSEGFP.통과pSEGFP화pSelABC공전화대장간균BL21(DE3),병진행IPTG유도표체,측정분석발현포질단백적형광강도여배양기서산염농도재일정범위내구유교호적선성관계.차결과표명,시험이초보구건료대장간균서생물검측기,위이용차방법진일보분석측정배경급생물양품중적서함량전정료기출.
