心肺血管病杂志
心肺血管病雜誌
심폐혈관병잡지
JOURNAL OF CARDIOVASCULAR AND PULMONARY DISEASES
2013年
4期
503-506
,共4页
赵莉敏%杜兰平%高宇翔%董磊%崔巍%蔺洁
趙莉敏%杜蘭平%高宇翔%董磊%崔巍%藺潔
조리민%두란평%고우상%동뢰%최외%린길
荧光光漂白恢复技术%缝隙连接通讯%人脐带动脉%内皮细胞%平滑肌细胞
熒光光漂白恢複技術%縫隙連接通訊%人臍帶動脈%內皮細胞%平滑肌細胞
형광광표백회복기술%봉극련접통신%인제대동맥%내피세포%평활기세포
Fluorescence redistribution after photobleaching%Gap junctional intercellular communication%Human umbilical artery%Endothelial cells%Smooth muscle cells
目的:应用双光子激光扫描共聚焦显微镜鉴定体外培养的脐动脉内皮细胞(ECs)和平滑肌细胞(SMCs),应用荧光光漂白恢复技术(FRAP)测定血管ECs、SMCs之间的缝隙连接通讯(GJIC)功能.方法:人脐动脉ECs、SMCs分离培养,Ⅷ因子和SMα-actin相关抗原鉴定ECs和SMCs,应用FRAP技术测定血管内皮细胞、平滑肌细胞之间的GJIC功能,记录实时成像结果,应用动态比(M)计算漂白区域内标记荧光的分子中动态分子的比例.结果:第一组ECs和SMCs单独培养,选择漂白细胞与周围至少3个同种细胞相连接,SMCs被漂白后平均M值为31.79 ±5.69；ECs被漂白后平均M值为23.43 ±2.11；第二组ECs和SMCs混合培养,选择ECs和SMCs独立相连的2个细胞,SMCs被漂白后平均M值为14.47±3.28,ECs被漂白后平均M值为6.41±0.80.结论:FRAP实时动态恢复曲线可直接观察荧光恢复强度及速度,参照FRAP恢复曲线,M值可做为组间GJIC比较相对定量的可靠指标,通过检测证实ECs和SMCs之间存在GJIC,且荧光由ECs向SMCs方向的传递大于由SMCs向ECs方向的传递.
目的:應用雙光子激光掃描共聚焦顯微鏡鑒定體外培養的臍動脈內皮細胞(ECs)和平滑肌細胞(SMCs),應用熒光光漂白恢複技術(FRAP)測定血管ECs、SMCs之間的縫隙連接通訊(GJIC)功能.方法:人臍動脈ECs、SMCs分離培養,Ⅷ因子和SMα-actin相關抗原鑒定ECs和SMCs,應用FRAP技術測定血管內皮細胞、平滑肌細胞之間的GJIC功能,記錄實時成像結果,應用動態比(M)計算漂白區域內標記熒光的分子中動態分子的比例.結果:第一組ECs和SMCs單獨培養,選擇漂白細胞與週圍至少3箇同種細胞相連接,SMCs被漂白後平均M值為31.79 ±5.69；ECs被漂白後平均M值為23.43 ±2.11；第二組ECs和SMCs混閤培養,選擇ECs和SMCs獨立相連的2箇細胞,SMCs被漂白後平均M值為14.47±3.28,ECs被漂白後平均M值為6.41±0.80.結論:FRAP實時動態恢複麯線可直接觀察熒光恢複彊度及速度,參照FRAP恢複麯線,M值可做為組間GJIC比較相對定量的可靠指標,通過檢測證實ECs和SMCs之間存在GJIC,且熒光由ECs嚮SMCs方嚮的傳遞大于由SMCs嚮ECs方嚮的傳遞.
목적:응용쌍광자격광소묘공취초현미경감정체외배양적제동맥내피세포(ECs)화평활기세포(SMCs),응용형광광표백회복기술(FRAP)측정혈관ECs、SMCs지간적봉극련접통신(GJIC)공능.방법:인제동맥ECs、SMCs분리배양,Ⅷ인자화SMα-actin상관항원감정ECs화SMCs,응용FRAP기술측정혈관내피세포、평활기세포지간적GJIC공능,기록실시성상결과,응용동태비(M)계산표백구역내표기형광적분자중동태분자적비례.결과:제일조ECs화SMCs단독배양,선택표백세포여주위지소3개동충세포상련접,SMCs피표백후평균M치위31.79 ±5.69；ECs피표백후평균M치위23.43 ±2.11；제이조ECs화SMCs혼합배양,선택ECs화SMCs독립상련적2개세포,SMCs피표백후평균M치위14.47±3.28,ECs피표백후평균M치위6.41±0.80.결론:FRAP실시동태회복곡선가직접관찰형광회복강도급속도,삼조FRAP회복곡선,M치가주위조간GJIC비교상대정량적가고지표,통과검측증실ECs화SMCs지간존재GJIC,차형광유ECs향SMCs방향적전체대우유SMCs향ECs방향적전체.
