湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2013年
10期
2436-2438,2442
,共4页
苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)%ODV-E18%酵母双杂交%自激活%细胞毒性
苜蓿銀紋夜蛾覈多角體病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)%ODV-E18%酵母雙雜交%自激活%細胞毒性
목숙은문야아핵다각체병독(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)%ODV-E18%효모쌍잡교%자격활%세포독성
Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus(AcMNPV)%ODV-E18%yeast two-hybrid%autonomous transcriptional activation%cytotoxity
用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nueleopolyhedrovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵栽体pGBKT7构建诱饵质粒pGBKT7-el8.将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受态细胞,被转化细胞在涂有X-gal的SD/-Trp营养缺陷型固体培养基上形成白色菌落；在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade固体培养基上均不形成菌落,表明诱饵基因表达产物BD-E18在这两种细胞中都不能激活报告基因转录.pGBKT7-e18转化的Y187细胞在SD/-Trp营养缺陷型液体培养基中的生长速度与空载体转化细胞相同,显示BD-E18对酵母细胞无细胞毒性.结果表明,AcMNPV ODV-E18可能不直接参与对宿主细胞或病毒基因表达的调节,其编码基因可以作为诱饵基因通过筛查病毒宿主cDNA文库识别与其相互作用的蛋白质.
用PCR方法擴增苜蓿銀紋夜蛾覈多角體病毒(Autographa californica multiple nueleopolyhedrovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,剋隆至酵母雙雜交誘餌栽體pGBKT7構建誘餌質粒pGBKT7-el8.將誘餌質粒分彆轉化酵母菌株Y187和AH109感受態細胞,被轉化細胞在塗有X-gal的SD/-Trp營養缺陷型固體培養基上形成白色菌落；在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade固體培養基上均不形成菌落,錶明誘餌基因錶達產物BD-E18在這兩種細胞中都不能激活報告基因轉錄.pGBKT7-e18轉化的Y187細胞在SD/-Trp營養缺陷型液體培養基中的生長速度與空載體轉化細胞相同,顯示BD-E18對酵母細胞無細胞毒性.結果錶明,AcMNPV ODV-E18可能不直接參與對宿主細胞或病毒基因錶達的調節,其編碼基因可以作為誘餌基因通過篩查病毒宿主cDNA文庫識彆與其相互作用的蛋白質.
용PCR방법확증목숙은문야아핵다각체병독(Autographa californica multiple nueleopolyhedrovirus,AcMNPV)피막단백ODV-E18기인,극륭지효모쌍잡교유이재체pGBKT7구건유이질립pGBKT7-el8.장유이질립분별전화효모균주Y187화AH109감수태세포,피전화세포재도유X-gal적SD/-Trp영양결함형고체배양기상형성백색균락；재SD/-Trp/-His화SD/-Trp/-Ade고체배양기상균불형성균락,표명유이기인표체산물BD-E18재저량충세포중도불능격활보고기인전록.pGBKT7-e18전화적Y187세포재SD/-Trp영양결함형액체배양기중적생장속도여공재체전화세포상동,현시BD-E18대효모세포무세포독성.결과표명,AcMNPV ODV-E18가능불직접삼여대숙주세포혹병독기인표체적조절,기편마기인가이작위유이기인통과사사병독숙주cDNA문고식별여기상호작용적단백질.
