中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2013年
13期
221-225
,共5页
冉芳%蒋江涛%赵虹%杨新惠%张波%王振华%郑秋生
冉芳%蔣江濤%趙虹%楊新惠%張波%王振華%鄭鞦生
염방%장강도%조홍%양신혜%장파%왕진화%정추생
紫草素%K562细胞%凋亡%活性氧
紫草素%K562細胞%凋亡%活性氧
자초소%K562세포%조망%활성양
shikonin%K562 cell%apoptosis%reactive oxygen species
目的:研究紫草素(shikonin)诱导人红白血病细胞(K562)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)染色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用；Hoechst 33258和吖啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙啶(ethidium bromide,EB)染色法观察细胞凋亡形态；反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测与凋亡相关基因:B细胞淋巴因子基因2相关X蛋白(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B细胞淋巴因子基因2同源3结构域相互作用基团死亡促进因子(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B细胞淋巴因子基因xL(B-cell lymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B细胞淋巴因子基因2同源拮抗因子(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B细胞淋巴因子-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B细胞淋巴因子基因2相关死亡促进因子(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)表达的变化；荧光染料二乙酸-2',7'-二氯荧光素盐(oxalic acid-2',7'-dichlorofluorescein,DCFHDA)分析细胞内总活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的变化；荧光染料5-氯甲基二已酸荧光素(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)分析细胞内还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量的变化.结果:①0.2～1.6 mg·L-1的紫草素对K562细胞增殖呈浓度依赖性抑制；②0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组细胞出现明显凋亡特征；③0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组促凋亡蛋白Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax的mRNA表达显著增加,抑制凋亡蛋白Bcl-w和Bcl-xL的mRNA表达明显下调；④0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组,细胞内总活性氧含量升高,还原型谷胱甘肽含量降低.结论:紫草素有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,该过程伴随细胞内氧化还原状态的改变,紫草素诱导的K562细胞的凋亡与细胞内氧化胁迫有关.
目的:研究紫草素(shikonin)誘導人紅白血病細胞(K562)凋亡作用併初步探討其機製.方法:噻唑藍(thiazolyl blue,MTT)染色法檢測紫草素對K562細胞的增殖抑製作用；Hoechst 33258和吖啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙啶(ethidium bromide,EB)染色法觀察細胞凋亡形態；反轉錄酶-聚閤酶鏈鎖反應(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法檢測與凋亡相關基因:B細胞淋巴因子基因2相關X蛋白(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B細胞淋巴因子基因2同源3結構域相互作用基糰死亡促進因子(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B細胞淋巴因子基因xL(B-cell lymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53上調凋亡調控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B細胞淋巴因子基因2同源拮抗因子(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B細胞淋巴因子-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B細胞淋巴因子基因2相關死亡促進因子(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)信使覈糖覈痠(Messenger RNA,mRNA)錶達的變化；熒光染料二乙痠-2',7'-二氯熒光素鹽(oxalic acid-2',7'-dichlorofluorescein,DCFHDA)分析細胞內總活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的變化；熒光染料5-氯甲基二已痠熒光素(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)分析細胞內還原型穀胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量的變化.結果:①0.2～1.6 mg·L-1的紫草素對K562細胞增殖呈濃度依賴性抑製；②0.2～0.5 mg·L-1的紫草素處理組細胞齣現明顯凋亡特徵；③0.2～0.5 mg·L-1的紫草素處理組促凋亡蛋白Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax的mRNA錶達顯著增加,抑製凋亡蛋白Bcl-w和Bcl-xL的mRNA錶達明顯下調；④0.2～0.5 mg·L-1的紫草素處理組,細胞內總活性氧含量升高,還原型穀胱甘肽含量降低.結論:紫草素有較彊的抑製K562細胞增殖併誘導其凋亡的作用,該過程伴隨細胞內氧化還原狀態的改變,紫草素誘導的K562細胞的凋亡與細胞內氧化脅迫有關.
목적:연구자초소(shikonin)유도인홍백혈병세포(K562)조망작용병초보탐토기궤제.방법:새서람(thiazolyl blue,MTT)염색법검측자초소대K562세포적증식억제작용；Hoechst 33258화아정등(acridine orange,AO)/추화을정(ethidium bromide,EB)염색법관찰세포조망형태；반전록매-취합매련쇄반응(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)법검측여조망상관기인:B세포림파인자기인2상관X단백(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B세포림파인자기인2동원3결구역상호작용기단사망촉진인자(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B세포림파인자기인xL(B-cell lymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53상조조망조공인자(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B세포림파인자기인2동원길항인자(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B세포림파인자-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B세포림파인자기인2상관사망촉진인자(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)신사핵당핵산(Messenger RNA,mRNA)표체적변화；형광염료이을산-2',7'-이록형광소염(oxalic acid-2',7'-dichlorofluorescein,DCFHDA)분석세포내총활성양(Reactive Oxygen Species,ROS)적변화；형광염료5-록갑기이이산형광소(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)분석세포내환원형곡광감태(reduced glutathione hormone,GSH)함량적변화.결과:①0.2～1.6 mg·L-1적자초소대K562세포증식정농도의뢰성억제；②0.2～0.5 mg·L-1적자초소처리조세포출현명현조망특정；③0.2～0.5 mg·L-1적자초소처리조촉조망단백Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax적mRNA표체현저증가,억제조망단백Bcl-w화Bcl-xL적mRNA표체명현하조；④0.2～0.5 mg·L-1적자초소처리조,세포내총활성양함량승고,환원형곡광감태함량강저.결론:자초소유교강적억제K562세포증식병유도기조망적작용,해과정반수세포내양화환원상태적개변,자초소유도적K562세포적조망여세포내양화협박유관.
