中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2013年
10期
1080-1084
,共5页
王羽%周围%廖翔%高原%戴红梅%岳俊杰%梁龙%呼和巴特尔
王羽%週圍%廖翔%高原%戴紅梅%嶽俊傑%樑龍%呼和巴特爾
왕우%주위%료상%고원%대홍매%악준걸%량룡%호화파특이
志贺菌福氏5a M90T%Apyrase%多克隆抗体
誌賀菌福氏5a M90T%Apyrase%多剋隆抗體
지하균복씨5a M90T%Apyrase%다극륭항체
shigella flexneri%5a M90T%Apyrase%Polyclonal antibody
目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价.方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白.以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗.Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清.结果:成功构建了原核表达载体pET24 a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功.结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础.
目的:剋隆編碼誌賀菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2併實現錶達,純化後免疫BALB/c小鼠製備鼠抗Apyrase的多剋隆抗體,併對多剋隆抗體進行評價.方法:通過PCR擴增的誌賀菌5a M90T中的基因phoN2剋隆至錶達載體pET24a中,將重組質粒轉化到E.coli BL21(DE3)中,篩選暘性剋隆,進行IPTG誘導錶達併純化Apyrase-HIS融閤蛋白.以純化的融閤蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,製備該蛋白的多抗.Western blot、ELISA、免疫熒光鑒定穫得的抗血清.結果:成功構建瞭原覈錶達載體pET24 a-Apyrase,經誘導錶達齣相對分子量為28 kD的融閤蛋白,用純化的融閤蛋白作為抗原免疫小鼠製備的多剋隆抗體,通過Western blot、ELISA、免疫熒光法證明多剋隆抗體製備成功.結論:成功製備瞭誌賀菌福氏5a特異性的鼠多剋隆抗體,為進一步研究Apyrase蛋白在誌賀菌福氏5a M90T中的錶達、定位及誌賀菌福氏5a M90T的快速檢測奠定瞭基礎.
목적:극륭편마지하균복씨5a M90T독력단백Apyrase적기인phoN2병실현표체,순화후면역BALB/c소서제비서항Apyrase적다극륭항체,병대다극륭항체진행평개.방법:통과PCR확증적지하균5a M90T중적기인phoN2극륭지표체재체pET24a중,장중조질립전화도E.coli BL21(DE3)중,사선양성극륭,진행IPTG유도표체병순화Apyrase-HIS융합단백.이순화적융합단백작위항원면역BALB/c소서,제비해단백적다항.Western blot、ELISA、면역형광감정획득적항혈청.결과:성공구건료원핵표체재체pET24 a-Apyrase,경유도표체출상대분자량위28 kD적융합단백,용순화적융합단백작위항원면역소서제비적다극륭항체,통과Western blot、ELISA、면역형광법증명다극륭항체제비성공.결론:성공제비료지하균복씨5a특이성적서다극륭항체,위진일보연구Apyrase단백재지하균복씨5a M90T중적표체、정위급지하균복씨5a M90T적쾌속검측전정료기출.
