中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
10期
1758-1763
,共6页
马文东%袁媛%杨奕%徐洪%邓海静%于婉莹%孙月%魏中秋%杨方
馬文東%袁媛%楊奕%徐洪%鄧海靜%于婉瑩%孫月%魏中鞦%楊方
마문동%원원%양혁%서홍%산해정%우완형%손월%위중추%양방
转化生长因子β%Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶%肌成纤维细胞%肺纤维化
轉化生長因子β%Rho相關捲麯螺鏇形成蛋白激酶%肌成纖維細胞%肺纖維化
전화생장인자β%Rho상관권곡라선형성단백격매%기성섬유세포%폐섬유화
Transforming growth factor beta%Rho-associated coiled-coil-forming protein kinase%Myofibroblasts%Pulmonary fibrosis
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用.方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(p-MBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达变化；(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达.结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝.随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6h、12 h和24h达到高峰.Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达均在24h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P＜0.05).(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用.
目的:探討轉化生長因子β1(TGF-β1)介導的RhoA/Rho相關捲麯螺鏇形成蛋白激酶(ROCK)通路在調控肺成纖維細胞嚮肌成纖維細胞分化過程中的作用.方法:胰酶消化法穫得原代培養的肺成纖維細胞,進行以下實驗:(1)觀察TGF-β1誘導肺成纖維細胞不同時間後p-RhoA、ROCK、燐痠化肌毬蛋白燐痠酶靶亞基(p-MBS)、血清應答因子(SRF)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白錶達變化；(2)將細胞分為對照組、TGF-β1誘導分化組和Y-27632(ROCK通路阻滯劑)榦預組,免疫細胞化學染色與Western blotting法分彆觀察與檢測ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白在細胞內的定位分佈與錶達.結果:(1)經TGF-β1誘導24 h後,大鼠肺成纖維細胞胞體內齣現大量平行或交扠排列的α-SMA抗體標記的肌絲.隨著TGF-β1誘導刺激時間的延長,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白錶達逐漸增高,其中RhoA/ROCK信號(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分彆在誘導後6h、12 h和24h達到高峰.Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原蛋白錶達均在24h達高峰,分彆為誘導前的2.19和3.04倍(P＜0.05).(2)與TGF-β1誘導分化組比較,噹給予Y-27632榦預後,在相應時點ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白錶達均明顯降低,差異有統計學意義(P＜0.05).結論:TGF-β1通過ROCK信號轉導通路的活化,刺激瞭大鼠肺成纖維細胞嚮肌成纖維細胞分化,進而促進瞭膠原蛋白的閤成,可能在(矽)肺纖維化形成過程中髮揮著重要作用.
목적:탐토전화생장인자β1(TGF-β1)개도적RhoA/Rho상관권곡라선형성단백격매(ROCK)통로재조공폐성섬유세포향기성섬유세포분화과정중적작용.방법:이매소화법획득원대배양적폐성섬유세포,진행이하실험:(1)관찰TGF-β1유도폐성섬유세포불동시간후p-RhoA、ROCK、린산화기구단백린산매파아기(p-MBS)、혈청응답인자(SRF)、α-평활기기동단백(α-SMA)、Ⅰ형화Ⅲ형효원단백표체변화；(2)장세포분위대조조、TGF-β1유도분화조화Y-27632(ROCK통로조체제)간예조,면역세포화학염색여Western blotting법분별관찰여검측ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ형화Ⅲ형효원단백재세포내적정위분포여표체.결과:(1)경TGF-β1유도24 h후,대서폐성섬유세포포체내출현대량평행혹교차배렬적α-SMA항체표기적기사.수착TGF-β1유도자격시간적연장,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ형화Ⅲ형효원단백표체축점증고,기중RhoA/ROCK신호(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF화α-SMA단백분별재유도후6h、12 h화24h체도고봉.Ⅰ형효원화Ⅲ형효원단백표체균재24h체고봉,분별위유도전적2.19화3.04배(P＜0.05).(2)여TGF-β1유도분화조비교,당급여Y-27632간예후,재상응시점ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、Ⅰ형화Ⅲ형효원단백표체균명현강저,차이유통계학의의(P＜0.05).결론:TGF-β1통과ROCK신호전도통로적활화,자격료대서폐성섬유세포향기성섬유세포분화,진이촉진료효원단백적합성,가능재(석)폐섬유화형성과정중발휘착중요작용.
