中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2013年
4期
622-628
,共7页
武扬%曹春明%王汉卿%李子木%孙震晓
武颺%曹春明%王漢卿%李子木%孫震曉
무양%조춘명%왕한경%리자목%손진효
去甲斑蝥素%程序性细胞死亡因子4%microRNA-21%人胃癌细胞,BGC-823
去甲斑蝥素%程序性細胞死亡因子4%microRNA-21%人胃癌細胞,BGC-823
거갑반모소%정서성세포사망인자4%microRNA-21%인위암세포,BGC-823
norcantharidin%programmed cell death 4%miR-21%human gastric cancer cell line,BGC-823 cell
目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制.方法 MTT法测定NCTD 5～640 μmol·L-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0,6,30和60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD60 μmol· L-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L-1作用4h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRTPCR)测定NCTD 60 μmol· L-1作用BGC-823细胞6,12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达.Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响.结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24,48和72 h IC50分别为74.5,35.0和10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30和60 μmol· L-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9％,47％和62％.NCTD对PDCD4mRNA表达无影响.与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响.NCTD 60 μmol-L-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P＜0.01).细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用.结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达.
目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性細胞死亡因子4(PDCD4)錶達的機製.方法 MTT法測定NCTD 5～640 μmol·L-1與人胃癌BGC-823細胞作用24,48和72 h細胞存活率;Western蛋白質印跡法測定NCTD 0,6,30和60 μmol·L-1作用BGC-823細胞24 h PDCD4蛋白錶達水平;NCTD60 μmol· L-1作用20 h後加入MG132 10 μmol·L-1作用4h對PDCD4蛋白錶達的影響;逆轉錄PCR法測定NCTD 60 μmol·L-1作用BGC-823細胞24 h後PDCD4mRNA錶達的變化;實時熒光定量PCR(qRTPCR)測定NCTD 60 μmol· L-1作用BGC-823細胞6,12和24 h後microRNA-21(miR-21)的錶達.Western蛋白質印跡法測定細胞轉染miR-21抑製劑對PDCD4蛋白錶達的影響.結果 NCTD作用後BGC-823細胞存活率明顯下降,NCTD作用BGC-823細胞24,48和72 h IC50分彆為74.5,35.0和10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30和60 μmol· L-1作用于BGC-823細胞24 h,PDCD4蛋白分彆降低9％,47％和62％.NCTD對PDCD4mRNA錶達無影響.與NCTD處理組相比,MG132和NCTD共處理對PDCD4蛋白錶達無明顯影響.NCTD 60 μmol-L-1作用BGC-823細胞12和24 h後,細胞中miR-21的錶達顯著升高(P＜0.01).細胞轉染miR-21抑製劑後,可抑製NCTD降低PDCD4蛋白錶達的作用.結論 NCTD通過調控miR-21降低PDCD4蛋白的錶達.
목적 연구거갑반모소(NCTD)강저정서성세포사망인자4(PDCD4)표체적궤제.방법 MTT법측정NCTD 5～640 μmol·L-1여인위암BGC-823세포작용24,48화72 h세포존활솔;Western단백질인적법측정NCTD 0,6,30화60 μmol·L-1작용BGC-823세포24 h PDCD4단백표체수평;NCTD60 μmol· L-1작용20 h후가입MG132 10 μmol·L-1작용4h대PDCD4단백표체적영향;역전록PCR법측정NCTD 60 μmol·L-1작용BGC-823세포24 h후PDCD4mRNA표체적변화;실시형광정량PCR(qRTPCR)측정NCTD 60 μmol· L-1작용BGC-823세포6,12화24 h후microRNA-21(miR-21)적표체.Western단백질인적법측정세포전염miR-21억제제대PDCD4단백표체적영향.결과 NCTD작용후BGC-823세포존활솔명현하강,NCTD작용BGC-823세포24,48화72 h IC50분별위74.5,35.0화10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30화60 μmol· L-1작용우BGC-823세포24 h,PDCD4단백분별강저9％,47％화62％.NCTD대PDCD4mRNA표체무영향.여NCTD처리조상비,MG132화NCTD공처리대PDCD4단백표체무명현영향.NCTD 60 μmol-L-1작용BGC-823세포12화24 h후,세포중miR-21적표체현저승고(P＜0.01).세포전염miR-21억제제후,가억제NCTD강저PDCD4단백표체적작용.결론 NCTD통과조공miR-21강저PDCD4단백적표체.
