畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
8期
1288-1296
,共9页
王潇娣%朱玲%廖春燕%黄仆%徐志文%郭万柱
王瀟娣%硃玲%廖春燕%黃僕%徐誌文%郭萬柱
왕소제%주령%료춘연%황부%서지문%곽만주
猪%核转录因子-kappaB%序列分析%实时荧光定量RT-PCR
豬%覈轉錄因子-kappaB%序列分析%實時熒光定量RT-PCR
저%핵전록인자-kappaB%서렬분석%실시형광정량RT-PCR
porcine(swine)%nuclear factor-kappaB (NF-κB)%sequence analysis%real-time fluorescence quantitative PCR
NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标.为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65 ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法.结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1662 bp,编码553 aa,成熟p50编码区长1653 bp,编码551 aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5％ p65位于细胞核内,78.3％p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区.荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95％左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies·μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰.本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础.
NF-κB信號通路在病毒感染、免疫損傷性疾病、腫瘤疾病中髮揮重要作用,其活化水平常作為機體免疫應答水平、疾病髮展進程的檢測指標.為穫得豬NF-κB p65/p50基因序列特徵併建立體外定量檢測其錶達水平的實時熒光定量PCR方法,作者對豬NF-κB p65 ORF和成熟p50編碼區進行RT-PCR擴增、剋隆、測序及生物信息學分析;設計特異性熒光定量引物,建立檢測p65、p50實時熒光定量PCR方法.結果顯示:所擴增的豬NF-κB p65ORF長1662 bp,編碼553 aa,成熟p50編碼區長1653 bp,編碼551 aa;與不同動物的p65、p50序列相似性均較高;56.5％ p65位于細胞覈內,78.3％p50存在于細胞質中,p65、p50均無信號肽及跨膜區.熒光定量結果錶明:起始模闆與Ct值之間線性關繫好,相關繫數達到0.999,擴增效率均在95％左右;敏感性高,初始模闆的檢齣下限達到101 copies·μL-1;特異性彊,擴增產物形成單一的特異性鎔解峰;重複性好,組內變異繫數均小于5‰.本試驗為進一步研究豬NF-κB p65/p50生物學功能及其在豬相關疾病髮生髮展中錶達量變化奠定瞭基礎.
NF-κB신호통로재병독감염、면역손상성질병、종류질병중발휘중요작용,기활화수평상작위궤체면역응답수평、질병발전진정적검측지표.위획득저NF-κB p65/p50기인서렬특정병건입체외정량검측기표체수평적실시형광정량PCR방법,작자대저NF-κB p65 ORF화성숙p50편마구진행RT-PCR확증、극륭、측서급생물신식학분석;설계특이성형광정량인물,건립검측p65、p50실시형광정량PCR방법.결과현시:소확증적저NF-κB p65ORF장1662 bp,편마553 aa,성숙p50편마구장1653 bp,편마551 aa;여불동동물적p65、p50서렬상사성균교고;56.5％ p65위우세포핵내,78.3％p50존재우세포질중,p65、p50균무신호태급과막구.형광정량결과표명:기시모판여Ct치지간선성관계호,상관계수체도0.999,확증효솔균재95％좌우;민감성고,초시모판적검출하한체도101 copies·μL-1;특이성강,확증산물형성단일적특이성용해봉;중복성호,조내변이계수균소우5‰.본시험위진일보연구저NF-κB p65/p50생물학공능급기재저상관질병발생발전중표체량변화전정료기출.
