畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
8期
1198-1204
,共7页
李达%孙伟%苏锐%张占英%马月辉%张有法%陈玲%吴文忠%周洪
李達%孫偉%囌銳%張佔英%馬月輝%張有法%陳玲%吳文忠%週洪
리체%손위%소예%장점영%마월휘%장유법%진령%오문충%주홍
绵羊%YAP1基因%真核表达载体%磷酸化位点突变体
綿羊%YAP1基因%真覈錶達載體%燐痠化位點突變體
면양%YAP1기인%진핵표체재체%린산화위점돌변체
sheep%YAP1 gene%eukaryotic expression vector%phosphorylation site mutant
本研究旨在克隆绵羊YAP1基因CDS序列,构建并鉴定其真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1,及其磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1 S42A.本研究利用RT-PCR技术,从湖羊背最长肌克隆YAP1基因编码区序列,T-A克隆到pMD 19-T载体中,进行测序.利用酶切和T4连接酶连接方法,将YAP1基因编码区克隆到pEGFP-C 1载体中,构建pEGFP-C 1-YAP1真核表达载体,以真核表达载体为模板,构建磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1 S42A,2种载体均进行PCR、BamHⅠ和XhoⅠ双酶切、BamHⅠ单酶切及测序鉴定.结果克隆出YAP 1基因的全长cDNA序列,获得GenBank登录号JQ 714252,其长度为1712 bp,编码区1212 bp,编码403个氨基酸.重组质粒pEGFP-C1-YAP1经PCR、酶切、测序鉴定,证实YAP1基因CDS区已正确克隆入pEGFP-C1表达载体;经测序鉴定,YAP1第42位丝氨酸成功突变为丙氨酸.本研究成功克隆绵羊YAP1基因全长cDNA序列,并构建了重组真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1及磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1 S42A,为进一步研究YAP1蛋白表达及其生物学活性奠定基础.
本研究旨在剋隆綿羊YAP1基因CDS序列,構建併鑒定其真覈錶達質粒pEGFP-C1-YAP1,及其燐痠化位點突變體pEGFP-C1-YAP1 S42A.本研究利用RT-PCR技術,從湖羊揹最長肌剋隆YAP1基因編碼區序列,T-A剋隆到pMD 19-T載體中,進行測序.利用酶切和T4連接酶連接方法,將YAP1基因編碼區剋隆到pEGFP-C 1載體中,構建pEGFP-C 1-YAP1真覈錶達載體,以真覈錶達載體為模闆,構建燐痠化位點突變體pEGFP-C1-YAP1 S42A,2種載體均進行PCR、BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切、BamHⅠ單酶切及測序鑒定.結果剋隆齣YAP 1基因的全長cDNA序列,穫得GenBank登錄號JQ 714252,其長度為1712 bp,編碼區1212 bp,編碼403箇氨基痠.重組質粒pEGFP-C1-YAP1經PCR、酶切、測序鑒定,證實YAP1基因CDS區已正確剋隆入pEGFP-C1錶達載體;經測序鑒定,YAP1第42位絲氨痠成功突變為丙氨痠.本研究成功剋隆綿羊YAP1基因全長cDNA序列,併構建瞭重組真覈錶達質粒pEGFP-C1-YAP1及燐痠化位點突變體pEGFP-C1-YAP1 S42A,為進一步研究YAP1蛋白錶達及其生物學活性奠定基礎.
본연구지재극륭면양YAP1기인CDS서렬,구건병감정기진핵표체질립pEGFP-C1-YAP1,급기린산화위점돌변체pEGFP-C1-YAP1 S42A.본연구이용RT-PCR기술,종호양배최장기극륭YAP1기인편마구서렬,T-A극륭도pMD 19-T재체중,진행측서.이용매절화T4련접매련접방법,장YAP1기인편마구극륭도pEGFP-C 1재체중,구건pEGFP-C 1-YAP1진핵표체재체,이진핵표체재체위모판,구건린산화위점돌변체pEGFP-C1-YAP1 S42A,2충재체균진행PCR、BamHⅠ화XhoⅠ쌍매절、BamHⅠ단매절급측서감정.결과극륭출YAP 1기인적전장cDNA서렬,획득GenBank등록호JQ 714252,기장도위1712 bp,편마구1212 bp,편마403개안기산.중조질립pEGFP-C1-YAP1경PCR、매절、측서감정,증실YAP1기인CDS구이정학극륭입pEGFP-C1표체재체;경측서감정,YAP1제42위사안산성공돌변위병안산.본연구성공극륭면양YAP1기인전장cDNA서렬,병구건료중조진핵표체질립pEGFP-C1-YAP1급린산화위점돌변체pEGFP-C1-YAP1 S42A,위진일보연구YAP1단백표체급기생물학활성전정기출.
