中国骨伤
中國骨傷
중국골상
CHINA JOURNAL OF ORTHOPAEDICS AND TRAUMATOLOGY
2013年
9期
760-763
,共4页
梁大川%白洁玉%杜少华%程鹏%王震%康宁%杨自权
樑大川%白潔玉%杜少華%程鵬%王震%康寧%楊自權
량대천%백길옥%두소화%정붕%왕진%강저%양자권
SOX9%慢病毒属%转染%骨髓间充质干细胞细胞
SOX9%慢病毒屬%轉染%骨髓間充質榦細胞細胞
SOX9%만병독속%전염%골수간충질간세포세포
SOX9%Lentivirus%Transfection%Bone mesenehymal stem cells
目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响.方法:针对小鼠SOX9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增.利用SOX9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率.同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达.结果:成功构建了Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞.RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默.结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且SOX9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础.
目的:構建小鼠S0X9基因榦擾的慢病毒載體,體外轉染小鼠骨髓間充質榦細胞,觀察小鼠SOX9基因在小鼠間充質榦細胞中的錶達影響.方法:針對小鼠SOX9基因序列,設計RNA榦擾靶點序列,閤成含榦擾序列的雙鏈DNAoligo連入酶切後的RNA榦擾載體上,構建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP載體,鑒定擴增.利用SOX9基因沉默載體體外轉染小鼠骨髓間充質細胞,利用倒置熒光顯微鏡觀察轉染是否成功,併通過流式細胞儀測定轉染效率.同時利用RT-PCR和Western Blot檢測小鼠SOX9基因的錶達.結果:成功構建瞭Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒載體,能高效轉染小鼠骨髓間充質細胞.RT-PCR和Western Blot檢測顯示經SOX9基因轉染的小鼠骨髓間充質細胞基因錶達沉默.結論:利用慢病毒結閤RNA榦擾技術敲減小鼠SOX9基因成功地轉染小鼠骨髓間充質榦細胞,且SOX9基因在小鼠骨髓間充質榦細胞中髮生瞭沉默,這為SOX9脩複軟骨損傷的進一步研究奠定瞭基礎.
목적:구건소서S0X9기인간우적만병독재체,체외전염소서골수간충질간세포,관찰소서SOX9기인재소서간충질간세포중적표체영향.방법:침대소서SOX9기인서렬,설계RNA간우파점서렬,합성함간우서렬적쌍련DNAoligo련입매절후적RNA간우재체상,구건Lenti-SOX9-siRNA-EGFP재체,감정확증.이용SOX9기인침묵재체체외전염소서골수간충질세포,이용도치형광현미경관찰전염시부성공,병통과류식세포의측정전염효솔.동시이용RT-PCR화Western Blot검측소서SOX9기인적표체.결과:성공구건료Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9기인침묵만병독재체,능고효전염소서골수간충질세포.RT-PCR화Western Blot검측현시경SOX9기인전염적소서골수간충질세포기인표체침묵.결론:이용만병독결합RNA간우기술고감소서SOX9기인성공지전염소서골수간충질간세포,차SOX9기인재소서골수간충질간세포중발생료침묵,저위SOX9수복연골손상적진일보연구전정료기출.
