热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2014年
7期
1416-1423
,共8页
张涛%沈文涛%言普%黎小瑛%周鹏
張濤%瀋文濤%言普%黎小瑛%週鵬
장도%침문도%언보%려소영%주붕
番木瓜畸形花叶病毒%原核表达%dsRNA%RNA沉默
番木瓜畸形花葉病毒%原覈錶達%dsRNA%RNA沉默
번목과기형화협병독%원핵표체%dsRNA%RNA침묵
Papaya leaf distortion mosaic virus (PLDMV)%Prokaryotic expression system%dsRNA%RNA silencing
番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长(879 bp),运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理:保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3~12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2~3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染.
番木瓜畸形花葉病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一種已對番木瓜種植業構成潛在威脅的新型病害,在轉基因植物備受爭議的揹景下,利用原覈錶達的dsRNA來防控病毒的策略不失為一種新的選擇.本文選取PLDMV CP基因全長(879 bp),運用OZ-LIC法構建瞭含有pdk內含子的ihpRNA結構,將其嵌入原覈錶達載體pSP73中,併轉化RNaseⅢ缺陷型大腸桿菌M-Jm109LacY,構建瞭1種能高錶達dsRNA的原覈錶達菌株M-Jm109LacY-CP879,以終濃度為0.4 mmol/LIPTG誘導後能夠穩定高效的錶達CP879-dsRNA.研究共設2箇處理:保護性處理與治療性處理.分彆用含有CP879-dsRNA的粗提液對這2箇處理的番木瓜植株進行噴施處理,通過統計髮病率、觀察病癥變化以及ELISA分析結果錶明,保護性處理能有效抑製番木瓜畸形花葉病毒的侵染,主要錶現為髮病時間推遲和相對較低的髮病率;治療性處理植株的病毒積纍量會在噴施後第3~12天內齣現暫時性的降低.結果錶明,保護效果優于治療效果,若每月噴施2~3次dsRNA粗提液,有望能夠有效地預防PLDMV的侵染.
번목과기형화협병독(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)시일충이대번목과충식업구성잠재위협적신형병해,재전기인식물비수쟁의적배경하,이용원핵표체적dsRNA래방공병독적책략불실위일충신적선택.본문선취PLDMV CP기인전장(879 bp),운용OZ-LIC법구건료함유pdk내함자적ihpRNA결구,장기감입원핵표체재체pSP73중,병전화RNaseⅢ결함형대장간균M-Jm109LacY,구건료1충능고표체dsRNA적원핵표체균주M-Jm109LacY-CP879,이종농도위0.4 mmol/LIPTG유도후능구은정고효적표체CP879-dsRNA.연구공설2개처리:보호성처리여치료성처리.분별용함유CP879-dsRNA적조제액대저2개처리적번목과식주진행분시처리,통과통계발병솔、관찰병증변화이급ELISA분석결과표명,보호성처리능유효억제번목과기형화협병독적침염,주요표현위발병시간추지화상대교저적발병솔;치료성처리식주적병독적루량회재분시후제3~12천내출현잠시성적강저.결과표명,보호효과우우치료효과,약매월분시2~3차dsRNA조제액,유망능구유효지예방PLDMV적침염.