草食家畜
草食傢畜
초식가축
GRASS-FEEDING LIVESTOCK
2013年
2期
58-62
,共5页
吴建勇%王登峰%杨学云%李建军%王治才
吳建勇%王登峰%楊學雲%李建軍%王治纔
오건용%왕등봉%양학운%리건군%왕치재
铜绿假单胞菌%外毒素A%克隆%表达
銅綠假單胞菌%外毒素A%剋隆%錶達
동록가단포균%외독소A%극륭%표체
为建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原核表达方法,采用PCR技术扩eta基因,将其插入pET-28a载体构建重组质粒pET-28a-eta,并对重组质粒进行双酶切、PCR及测序鉴定.转入BL21(DE3)中诱导表达,检测目的蛋白大小及反应原性,然后进行表达条件的优化及其表达形式检测.结果表明,所扩增eta基因大小为1917 bp,与GeneBank参比序列一致性在98.70％;蛋白分析表明,rETA大小为74 KDa,具有和天然毒素相似的反应原性.目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG诱导3h获得最佳表达.该蛋白在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主.该研究为进一步开展ETA的批量纯化提供了前提条件.
為建立銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原覈錶達方法,採用PCR技術擴eta基因,將其插入pET-28a載體構建重組質粒pET-28a-eta,併對重組質粒進行雙酶切、PCR及測序鑒定.轉入BL21(DE3)中誘導錶達,檢測目的蛋白大小及反應原性,然後進行錶達條件的優化及其錶達形式檢測.結果錶明,所擴增eta基因大小為1917 bp,與GeneBank參比序列一緻性在98.70％;蛋白分析錶明,rETA大小為74 KDa,具有和天然毒素相似的反應原性.目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG誘導3h穫得最佳錶達.該蛋白在超聲波裂解上清和包涵體中均有分佈,但主要以包涵體為主.該研究為進一步開展ETA的批量純化提供瞭前提條件.
위건립동록가단포균(Pseudomonas aeruginosa)외독소A(Exotoxin A,ETA)적원핵표체방법,채용PCR기술확eta기인,장기삽입pET-28a재체구건중조질립pET-28a-eta,병대중조질립진행쌍매절、PCR급측서감정.전입BL21(DE3)중유도표체,검측목적단백대소급반응원성,연후진행표체조건적우화급기표체형식검측.결과표명,소확증eta기인대소위1917 bp,여GeneBank삼비서렬일치성재98.70％;단백분석표명,rETA대소위74 KDa,구유화천연독소상사적반응원성.목적기인재37℃、0.6 mmol/LIPTG유도3h획득최가표체.해단백재초성파렬해상청화포함체중균유분포,단주요이포함체위주.해연구위진일보개전ETA적비량순화제공료전제조건.
