江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
2期
36-38
,共3页
杨金华%秦瑞云%付庆云%邓传良
楊金華%秦瑞雲%付慶雲%鄧傳良
양금화%진서운%부경운%산전량
菠菜%ISSR-PCR%体系%优化
菠菜%ISSR-PCR%體繫%優化
파채%ISSR-PCR%체계%우화
以菠菜雌雄成株的幼嫩叶片为材料,用改良2×CTAB法提取基因组DNA,研究影响菠菜ISSR-PCR的因素,分别对模板浓度、Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度进行优化,建立了适用于菠菜ISSR-PCR的反应体系(25μL):模板用量为60 ng、引物浓度为0.4 μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTPs用量为0.2 mmol/L、Taq酶用量为0.5U.扩增程序为95℃预变性5 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环35次,72℃延伸8 min.该体系以菠菜雌雄株进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高、重复性高,且在雌株中发现特异条带.
以菠菜雌雄成株的幼嫩葉片為材料,用改良2×CTAB法提取基因組DNA,研究影響菠菜ISSR-PCR的因素,分彆對模闆濃度、Mg2+濃度、引物濃度、dNTPs濃度、TaqDNA聚閤酶濃度進行優化,建立瞭適用于菠菜ISSR-PCR的反應體繫(25μL):模闆用量為60 ng、引物濃度為0.4 μmol/L、Mg2+濃度為2.0 mmol/L、dNTPs用量為0.2 mmol/L、Taq酶用量為0.5U.擴增程序為95℃預變性5 min,94℃變性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循環35次,72℃延伸8 min.該體繫以菠菜雌雄株進行擴增驗證,得到的條帶清晰、多態性高、重複性高,且在雌株中髮現特異條帶.
이파채자웅성주적유눈협편위재료,용개량2×CTAB법제취기인조DNA,연구영향파채ISSR-PCR적인소,분별대모판농도、Mg2+농도、인물농도、dNTPs농도、TaqDNA취합매농도진행우화,건립료괄용우파채ISSR-PCR적반응체계(25μL):모판용량위60 ng、인물농도위0.4 μmol/L、Mg2+농도위2.0 mmol/L、dNTPs용량위0.2 mmol/L、Taq매용량위0.5U.확증정서위95℃예변성5 min,94℃변성1 min,52℃퇴화1 min,72℃연신2 min,순배35차,72℃연신8 min.해체계이파채자웅주진행확증험증,득도적조대청석、다태성고、중복성고,차재자주중발현특이조대.
