中国真菌学杂志
中國真菌學雜誌
중국진균학잡지
CHINESE JOURNAL OF MYCOLOGY
2013年
4期
198-201
,共4页
姚响文%赵柳娅%颜钰%鹿辉%曹颖瑛%姜远英
姚響文%趙柳婭%顏鈺%鹿輝%曹穎瑛%薑遠英
요향문%조류아%안옥%록휘%조영영%강원영
白念珠菌%SPE1%高表达
白唸珠菌%SPE1%高錶達
백념주균%SPE1%고표체
Candida albicans%SPE1%overexpression
目的 构建白念珠菌SPE1基因高表达菌株.方法 将白念珠菌SPE1基因的ORF置于高表达质粒载体pCaE-XP的MET3启动子后面,构建pCaEXP-SPE1的高表达质粒,然后采用醋酸锂转染法将高表达质粒转染白念珠菌RM1000中,在SD-ura-met-cys-选择性固体培养基上筛选阳性克隆,抽取基因组进行PCR验证,将验证为阳性转染子的菌落采用RealTime RT-PCR方法进行SPE1基因转录水平的表达验证.结果 通过酶切鉴定pCaEXP-SPE1高表达质粒构建正确；通过PCR验证表明SPE1基因整合到亲本菌中的RP10位点；通过Real Time RT-PCR方法筛选出SPE1基因在转录水平高表达的菌株.结论 利用高表达质粒载体pCaEXP通过基因同源重组等方法正确构建SPE1基因高表达的白念珠菌.
目的 構建白唸珠菌SPE1基因高錶達菌株.方法 將白唸珠菌SPE1基因的ORF置于高錶達質粒載體pCaE-XP的MET3啟動子後麵,構建pCaEXP-SPE1的高錶達質粒,然後採用醋痠鋰轉染法將高錶達質粒轉染白唸珠菌RM1000中,在SD-ura-met-cys-選擇性固體培養基上篩選暘性剋隆,抽取基因組進行PCR驗證,將驗證為暘性轉染子的菌落採用RealTime RT-PCR方法進行SPE1基因轉錄水平的錶達驗證.結果 通過酶切鑒定pCaEXP-SPE1高錶達質粒構建正確；通過PCR驗證錶明SPE1基因整閤到親本菌中的RP10位點；通過Real Time RT-PCR方法篩選齣SPE1基因在轉錄水平高錶達的菌株.結論 利用高錶達質粒載體pCaEXP通過基因同源重組等方法正確構建SPE1基因高錶達的白唸珠菌.
목적 구건백념주균SPE1기인고표체균주.방법 장백념주균SPE1기인적ORF치우고표체질립재체pCaE-XP적MET3계동자후면,구건pCaEXP-SPE1적고표체질립,연후채용작산리전염법장고표체질립전염백념주균RM1000중,재SD-ura-met-cys-선택성고체배양기상사선양성극륭,추취기인조진행PCR험증,장험증위양성전염자적균락채용RealTime RT-PCR방법진행SPE1기인전록수평적표체험증.결과 통과매절감정pCaEXP-SPE1고표체질립구건정학；통과PCR험증표명SPE1기인정합도친본균중적RP10위점；통과Real Time RT-PCR방법사선출SPE1기인재전록수평고표체적균주.결론 이용고표체질립재체pCaEXP통과기인동원중조등방법정학구건SPE1기인고표체적백념주균.
