浙江农业科学
浙江農業科學
절강농업과학
JOURNAL OF ZHEJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
9期
1198-1201,1205
,共5页
桃拉综合症病毒%南美白对虾%环介导逆转录等温扩增%快速检测
桃拉綜閤癥病毒%南美白對蝦%環介導逆轉錄等溫擴增%快速檢測
도랍종합증병독%남미백대하%배개도역전록등온확증%쾌속검측
根据对虾桃拉综合征病毒(TSV)结构蛋白基因保守序列,利用Primer Explorer 4.0软件设计了4条引物,建立桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速(RT-LAMP)检测方法,对反应温度和反应时间等参数进行了优化;同时将建立的RT-LAMP检测方法与RT-PCR进行比较分析,RT-LAMP的检测灵敏度比RT-PCR高10倍.结果表明,RT-LAMP最适反应在60℃恒温条件60 min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;反应体系中添加SYBR Green Ⅰ荧光染料后,绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果;RT-LAMP对感染TSV的对虾检测呈阳性,而对对虾其他常见病原检测均为阴性,具有高的特异性.
根據對蝦桃拉綜閤徵病毒(TSV)結構蛋白基因保守序列,利用Primer Explorer 4.0軟件設計瞭4條引物,建立桃拉綜閤徵病毒環介導逆轉錄等溫擴增快速(RT-LAMP)檢測方法,對反應溫度和反應時間等參數進行瞭優化;同時將建立的RT-LAMP檢測方法與RT-PCR進行比較分析,RT-LAMP的檢測靈敏度比RT-PCR高10倍.結果錶明,RT-LAMP最適反應在60℃恆溫條件60 min內完成,凝膠電泳呈現梯型條帶;反應體繫中添加SYBR Green Ⅰ熒光染料後,綠色的暘性結果明顯區彆于橙色陰性結果;RT-LAMP對感染TSV的對蝦檢測呈暘性,而對對蝦其他常見病原檢測均為陰性,具有高的特異性.
근거대하도랍종합정병독(TSV)결구단백기인보수서렬,이용Primer Explorer 4.0연건설계료4조인물,건립도랍종합정병독배개도역전록등온확증쾌속(RT-LAMP)검측방법,대반응온도화반응시간등삼수진행료우화;동시장건립적RT-LAMP검측방법여RT-PCR진행비교분석,RT-LAMP적검측령민도비RT-PCR고10배.결과표명,RT-LAMP최괄반응재60℃항온조건60 min내완성,응효전영정현제형조대;반응체계중첨가SYBR Green Ⅰ형광염료후,록색적양성결과명현구별우등색음성결과;RT-LAMP대감염TSV적대하검측정양성,이대대하기타상견병원검측균위음성,구유고적특이성.
