浙江农业科学
浙江農業科學
절강농업과학
JOURNAL OF ZHEJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
9期
1151-1156
,共6页
甲壳类动物%壳二糖酶%分离纯化%动力学性质
甲殼類動物%殼二糖酶%分離純化%動力學性質
갑각류동물%각이당매%분리순화%동역학성질
为制备免疫原以测量个体生长和繁殖过程中所释放的几丁质酶,从大型溞(Daphnia magna)体内提纯了N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52),经硫酸铵沉淀分级分离、DEAE Sephadex A-25阴离子交换柱层析和Sephadex G-150分子筛柱层析纯化等步骤,酶的纯化倍数为20.09.纯酶比活力为2243380 U· mg-1.酶分子中各亚基的分子量分别为128,99和71 Ku.根据测试,酶促反应的米氏常数为0.300 mmol·L-1,最大反应速度为0.072 μmol· mg-1·min-1.酶催化底物分解的最适pH为7.0,最适反应温度为45℃;酶在值4.2 ～7.8的范围内活性处于高位;在不高于35℃的温度下处理30 min,酶活性下降不明显.至于从大型潘培养液中获得的NAGase,其催化底物分解的最适pH值为7.4,最适反应温度为40℃,该酶在pH值4.6～7.8的范围内活性处于高位,在不高于40℃下处理30 min,酶活性下降不明显.这显示被提纯的酶和培养液中分离的酶在温度、pH以及热稳定性和酸碱稳定性方面均具有较高程度的相似性,有可能属于相同分子型.
為製備免疫原以測量箇體生長和繁殖過程中所釋放的幾丁質酶,從大型溞(Daphnia magna)體內提純瞭N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52),經硫痠銨沉澱分級分離、DEAE Sephadex A-25陰離子交換柱層析和Sephadex G-150分子篩柱層析純化等步驟,酶的純化倍數為20.09.純酶比活力為2243380 U· mg-1.酶分子中各亞基的分子量分彆為128,99和71 Ku.根據測試,酶促反應的米氏常數為0.300 mmol·L-1,最大反應速度為0.072 μmol· mg-1·min-1.酶催化底物分解的最適pH為7.0,最適反應溫度為45℃;酶在值4.2 ～7.8的範圍內活性處于高位;在不高于35℃的溫度下處理30 min,酶活性下降不明顯.至于從大型潘培養液中穫得的NAGase,其催化底物分解的最適pH值為7.4,最適反應溫度為40℃,該酶在pH值4.6～7.8的範圍內活性處于高位,在不高于40℃下處理30 min,酶活性下降不明顯.這顯示被提純的酶和培養液中分離的酶在溫度、pH以及熱穩定性和痠堿穩定性方麵均具有較高程度的相似性,有可能屬于相同分子型.
위제비면역원이측량개체생장화번식과정중소석방적궤정질매,종대형소(Daphnia magna)체내제순료N-을선-β-D-안기포도당감매(EC 3.2.1.52),경류산안침정분급분리、DEAE Sephadex A-25음리자교환주층석화Sephadex G-150분자사주층석순화등보취,매적순화배수위20.09.순매비활력위2243380 U· mg-1.매분자중각아기적분자량분별위128,99화71 Ku.근거측시,매촉반응적미씨상수위0.300 mmol·L-1,최대반응속도위0.072 μmol· mg-1·min-1.매최화저물분해적최괄pH위7.0,최괄반응온도위45℃;매재치4.2 ～7.8적범위내활성처우고위;재불고우35℃적온도하처리30 min,매활성하강불명현.지우종대형반배양액중획득적NAGase,기최화저물분해적최괄pH치위7.4,최괄반응온도위40℃,해매재pH치4.6～7.8적범위내활성처우고위,재불고우40℃하처리30 min,매활성하강불명현.저현시피제순적매화배양액중분리적매재온도、pH이급열은정성화산감은정성방면균구유교고정도적상사성,유가능속우상동분자형.
