中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
10期
865-868,872
,共5页
卢志涛%王桂丽%马艳萍%崔鑫%任高伟%齐莹%阮强%孙峥嵘
盧誌濤%王桂麗%馬豔萍%崔鑫%任高偉%齊瑩%阮彊%孫崢嶸
로지도%왕계려%마염평%최흠%임고위%제형%원강%손쟁영
人巨细胞病毒%UL141蛋白%酵母双杂交系统%人胎脑cDNA文库
人巨細胞病毒%UL141蛋白%酵母雙雜交繫統%人胎腦cDNA文庫
인거세포병독%UL141단백%효모쌍잡교계통%인태뇌cDNA문고
human cytomegalovirus%UL141 protein%yeast two-hybrid system%human fetus brain cDNA library
目的 应用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库中与人巨细胞病毒(HCMV) UL141编码蛋白相互作用的蛋白,以进一步研究HCMV UL141的生物学功能,为揭示HCMV先天感染机制奠定基础.方法 采用PCR技术扩增HCMV UL141基因片段,将其插入到pGBKT7载体中,构建成诱饵质粒pGBKT7-UL141.然后将pGBKT7-UL141转化到酵母感受态细胞AH109中,于一缺培养基(SD/-Trp)上筛选生长.再将人胎脑cDNA文库质粒转化到含有pGBKT7-UL141质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)中筛选相互作用的人胎脑cDNA文库蛋白.通过显色反应挑选显蓝色的阳性克隆,提取相应质粒将其转化到大肠杆菌中,并进行回转验证.最后对筛选得到的阳性克隆进行测序及生物信息学分析.结果 诱饵质粒pGBKT7-UL141构建成功.筛选获得6个克隆与HCMV UL141编码蛋白相互作用,其中1个基因编码人类染色质解旋酶DNA结合蛋白3(CHD3).结论 成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL141编码蛋白相互作用的人体组织蛋白—CHD3,提示UL141蛋白可能与病毒的免疫逃避,干扰正常细胞的生长、分化相关.
目的 應用酵母雙雜交技術篩選人胎腦cDNA文庫中與人巨細胞病毒(HCMV) UL141編碼蛋白相互作用的蛋白,以進一步研究HCMV UL141的生物學功能,為揭示HCMV先天感染機製奠定基礎.方法 採用PCR技術擴增HCMV UL141基因片段,將其插入到pGBKT7載體中,構建成誘餌質粒pGBKT7-UL141.然後將pGBKT7-UL141轉化到酵母感受態細胞AH109中,于一缺培養基(SD/-Trp)上篩選生長.再將人胎腦cDNA文庫質粒轉化到含有pGBKT7-UL141質粒的AH109菌株中,在四缺培養基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)中篩選相互作用的人胎腦cDNA文庫蛋白.通過顯色反應挑選顯藍色的暘性剋隆,提取相應質粒將其轉化到大腸桿菌中,併進行迴轉驗證.最後對篩選得到的暘性剋隆進行測序及生物信息學分析.結果 誘餌質粒pGBKT7-UL141構建成功.篩選穫得6箇剋隆與HCMV UL141編碼蛋白相互作用,其中1箇基因編碼人類染色質解鏇酶DNA結閤蛋白3(CHD3).結論 成功應用酵母雙雜交繫統篩選齣與HCMV UL141編碼蛋白相互作用的人體組織蛋白—CHD3,提示UL141蛋白可能與病毒的免疫逃避,榦擾正常細胞的生長、分化相關.
목적 응용효모쌍잡교기술사선인태뇌cDNA문고중여인거세포병독(HCMV) UL141편마단백상호작용적단백,이진일보연구HCMV UL141적생물학공능,위게시HCMV선천감염궤제전정기출.방법 채용PCR기술확증HCMV UL141기인편단,장기삽입도pGBKT7재체중,구건성유이질립pGBKT7-UL141.연후장pGBKT7-UL141전화도효모감수태세포AH109중,우일결배양기(SD/-Trp)상사선생장.재장인태뇌cDNA문고질립전화도함유pGBKT7-UL141질립적AH109균주중,재사결배양기(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)중사선상호작용적인태뇌cDNA문고단백.통과현색반응도선현람색적양성극륭,제취상응질립장기전화도대장간균중,병진행회전험증.최후대사선득도적양성극륭진행측서급생물신식학분석.결과 유이질립pGBKT7-UL141구건성공.사선획득6개극륭여HCMV UL141편마단백상호작용,기중1개기인편마인류염색질해선매DNA결합단백3(CHD3).결론 성공응용효모쌍잡교계통사선출여HCMV UL141편마단백상호작용적인체조직단백—CHD3,제시UL141단백가능여병독적면역도피,간우정상세포적생장、분화상관.
