临床普外科电子杂志
臨床普外科電子雜誌
림상보외과전자잡지
Journal of General Surgery for Clinicians (Electronic Version)
2013年
1期
16-21
,共6页
马贵亮%宣世英%朱新红%毛伟征
馬貴亮%宣世英%硃新紅%毛偉徵
마귀량%선세영%주신홍%모위정
慢病毒载体%人LIGHT基因%人脐血间质干细胞
慢病毒載體%人LIGHT基因%人臍血間質榦細胞
만병독재체%인LIGHT기인%인제혈간질간세포
目的 构建带有人LIGHT基因的慢病毒载体,观察其在人脐血间质干细胞中的表达.方法 通过逆转录聚合酶链反应从PCD DNA-LIGHT质粒中获得人LIGHT基因,利用infusion技术重组构建慢病毒载体质粒pGC-FU-LIGHT,在脂质体lipofectamine 2000介导下与结构质粒pHelper1.0及包膜蛋白质粒pHelper2.0共转染293T细胞包装生产慢病毒.将人脐血间质干细胞分为实验组(pGC-FU-LIGHT)、空载体对照组(pGC-FU-EGFP)及空白组(脐血间质干细胞),分别用重组慢病毒、空载慢病毒、PBS感染后,采用RT-PCR以及Elisa检测LIGHT表达情况.结果 所获LIGHT基因经测序后与Gene Bank报道序列完全一致;重组慢病毒载体质粒pGC-FU-LIGHT经鉴定正确;三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2×107TU/L,感染UCBMSCs后RT-PCR、Elisa检测各组细胞均有LIGHT的表达,其中试验组pGC-FU-LIGHT组更大量表达LIGHT,与其余2组(pGC-FU-EGFP、UCBMSCs)比较差异具有统计学意义.结论 成功构建带有LIGHT基因的慢病毒载体并实现在脐血间质干细胞中的表达,为间充质干细胞移植治疗胃癌的应用奠定了基础.
目的 構建帶有人LIGHT基因的慢病毒載體,觀察其在人臍血間質榦細胞中的錶達.方法 通過逆轉錄聚閤酶鏈反應從PCD DNA-LIGHT質粒中穫得人LIGHT基因,利用infusion技術重組構建慢病毒載體質粒pGC-FU-LIGHT,在脂質體lipofectamine 2000介導下與結構質粒pHelper1.0及包膜蛋白質粒pHelper2.0共轉染293T細胞包裝生產慢病毒.將人臍血間質榦細胞分為實驗組(pGC-FU-LIGHT)、空載體對照組(pGC-FU-EGFP)及空白組(臍血間質榦細胞),分彆用重組慢病毒、空載慢病毒、PBS感染後,採用RT-PCR以及Elisa檢測LIGHT錶達情況.結果 所穫LIGHT基因經測序後與Gene Bank報道序列完全一緻;重組慢病毒載體質粒pGC-FU-LIGHT經鑒定正確;三質粒共轉染293T細胞成功,收集、濃縮病毒後測定其滴度為2×107TU/L,感染UCBMSCs後RT-PCR、Elisa檢測各組細胞均有LIGHT的錶達,其中試驗組pGC-FU-LIGHT組更大量錶達LIGHT,與其餘2組(pGC-FU-EGFP、UCBMSCs)比較差異具有統計學意義.結論 成功構建帶有LIGHT基因的慢病毒載體併實現在臍血間質榦細胞中的錶達,為間充質榦細胞移植治療胃癌的應用奠定瞭基礎.
목적 구건대유인LIGHT기인적만병독재체,관찰기재인제혈간질간세포중적표체.방법 통과역전록취합매련반응종PCD DNA-LIGHT질립중획득인LIGHT기인,이용infusion기술중조구건만병독재체질립pGC-FU-LIGHT,재지질체lipofectamine 2000개도하여결구질립pHelper1.0급포막단백질립pHelper2.0공전염293T세포포장생산만병독.장인제혈간질간세포분위실험조(pGC-FU-LIGHT)、공재체대조조(pGC-FU-EGFP)급공백조(제혈간질간세포),분별용중조만병독、공재만병독、PBS감염후,채용RT-PCR이급Elisa검측LIGHT표체정황.결과 소획LIGHT기인경측서후여Gene Bank보도서렬완전일치;중조만병독재체질립pGC-FU-LIGHT경감정정학;삼질립공전염293T세포성공,수집、농축병독후측정기적도위2×107TU/L,감염UCBMSCs후RT-PCR、Elisa검측각조세포균유LIGHT적표체,기중시험조pGC-FU-LIGHT조경대량표체LIGHT,여기여2조(pGC-FU-EGFP、UCBMSCs)비교차이구유통계학의의.결론 성공구건대유LIGHT기인적만병독재체병실현재제혈간질간세포중적표체,위간충질간세포이식치료위암적응용전정료기출.
