国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2014年
4期
464-466
,共3页
肝炎病毒,乙型%聚合酶链反应%质粒
肝炎病毒,乙型%聚閤酶鏈反應%質粒
간염병독,을형%취합매련반응%질립
hepatitis B virus%polymerase chain reaction%plasmid
目的 建立一种采用Lightcycler系统进行HBV DNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值.方法 针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBV RT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌(DH5α),经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品.结果 用于制成外标准品的质粒经1∶10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为:Y=-3.344X+37(r2 =0.999 9);通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBV DNA,表明其最低检测限为5×102 IU/mL;拷贝数介于5×102～5×108 IU/mL之间的HBV DNA浓度与Ct值具有良好的线性关系.结论 外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情.
目的 建立一種採用Lightcycler繫統進行HBV DNA實時熒光定量PCR的方法,併探討其臨床應用價值.方法 針對HBV基因組S區設計一對擴增引物,併通過預實驗嚴格優化反應體繫的組成和條件;將T載體與HBV RT區擴增後純化的產物進行連接反應,然後轉染大腸桿菌(DH5α),經藍、白斑篩選後挑取暘性菌落,提取質粒,製備外標準品.結果 用于製成外標準品的質粒經1∶10的緩遲液倍比稀釋,製作標準麯線,線性方程為:Y=-3.344X+37(r2 =0.999 9);通過檢測已知濃度併經倍比稀釋的HBV DNA,錶明其最低檢測限為5×102 IU/mL;拷貝數介于5×102～5×108 IU/mL之間的HBV DNA濃度與Ct值具有良好的線性關繫.結論 外標法實時熒光定量PCR是一種定量相對準確、靈敏度高、特異性彊、操作相對簡便的方法;該方法可用于乙型肝炎患者病情鑑測,有效指導臨床用藥;聯閤該法與血清標誌物檢測,可更準確評價HBV感染者病情.
목적 건립일충채용Lightcycler계통진행HBV DNA실시형광정량PCR적방법,병탐토기림상응용개치.방법 침대HBV기인조S구설계일대확증인물,병통과예실험엄격우화반응체계적조성화조건;장T재체여HBV RT구확증후순화적산물진행련접반응,연후전염대장간균(DH5α),경람、백반사선후도취양성균락,제취질립,제비외표준품.결과 용우제성외표준품적질립경1∶10적완충액배비희석,제작표준곡선,선성방정위:Y=-3.344X+37(r2 =0.999 9);통과검측이지농도병경배비희석적HBV DNA,표명기최저검측한위5×102 IU/mL;고패수개우5×102～5×108 IU/mL지간적HBV DNA농도여Ct치구유량호적선성관계.결론 외표법실시형광정량PCR시일충정량상대준학、령민도고、특이성강、조작상대간편적방법;해방법가용우을형간염환자병정감측,유효지도림상용약;연합해법여혈청표지물검측,가경준학평개HBV감염자병정.
