国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2014年
4期
460-462
,共3页
亲和层析%木瓜蛋白酶%抗原结合片段
親和層析%木瓜蛋白酶%抗原結閤片段
친화층석%목과단백매%항원결합편단
affinity chromatography%papain%antigen binding fragment
目的 建立利用抗原亲和柱及蛋白G亲和柱纯化抗体木瓜蛋白酶酶切产物中高纯度Fab片段的方法.方法 以抗体对应的抗原蛋白与NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow活化偶联填料偶联制备抗原免疫亲和层析柱,将抗体木瓜蛋白酶酶切产物分剐通过蛋白G柱及抗原亲和柱制备抗体的Fab片段.通过SDSPAGE电泳、ELISA测定及临床类风湿因子阳性血清的干扰实验鉴定其制备效果.结果 抗体木瓜蛋白酶酶切产物分别通过蛋白G柱及抗原亲和柱后可以依次去除抗体Fc片段及未切开的抗体、木瓜蛋白酶及失活的Fab抗体片段,最终获得高纯度、高活性的Fab抗体片段.SDS-PAGE电泳、ELISA测定抗体Fc段被完全去除,双抗夹心ELISA检测能消除类风湿因子阳性血清导致的假阳性.结论 成功建立了双亲和柱分离纯化抗体Fab片段的方法,该方法适用于快速、高质量、大规模制备Fab抗体片段.
目的 建立利用抗原親和柱及蛋白G親和柱純化抗體木瓜蛋白酶酶切產物中高純度Fab片段的方法.方法 以抗體對應的抗原蛋白與NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow活化偶聯填料偶聯製備抗原免疫親和層析柱,將抗體木瓜蛋白酶酶切產物分剮通過蛋白G柱及抗原親和柱製備抗體的Fab片段.通過SDSPAGE電泳、ELISA測定及臨床類風濕因子暘性血清的榦擾實驗鑒定其製備效果.結果 抗體木瓜蛋白酶酶切產物分彆通過蛋白G柱及抗原親和柱後可以依次去除抗體Fc片段及未切開的抗體、木瓜蛋白酶及失活的Fab抗體片段,最終穫得高純度、高活性的Fab抗體片段.SDS-PAGE電泳、ELISA測定抗體Fc段被完全去除,雙抗夾心ELISA檢測能消除類風濕因子暘性血清導緻的假暘性.結論 成功建立瞭雙親和柱分離純化抗體Fab片段的方法,該方法適用于快速、高質量、大規模製備Fab抗體片段.
목적 건립이용항원친화주급단백G친화주순화항체목과단백매매절산물중고순도Fab편단적방법.방법 이항체대응적항원단백여NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow활화우련전료우련제비항원면역친화층석주,장항체목과단백매매절산물분과통과단백G주급항원친화주제비항체적Fab편단.통과SDSPAGE전영、ELISA측정급림상류풍습인자양성혈청적간우실험감정기제비효과.결과 항체목과단백매매절산물분별통과단백G주급항원친화주후가이의차거제항체Fc편단급미절개적항체、목과단백매급실활적Fab항체편단,최종획득고순도、고활성적Fab항체편단.SDS-PAGE전영、ELISA측정항체Fc단피완전거제,쌍항협심ELISA검측능소제류풍습인자양성혈청도치적가양성.결론 성공건립료쌍친화주분리순화항체Fab편단적방법,해방법괄용우쾌속、고질량、대규모제비Fab항체편단.
