畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
6期
36-39
,共4页
陶晓莉%吕利英%朱弘焱%苏玉虹
陶曉莉%呂利英%硃弘焱%囌玉虹
도효리%려리영%주홍염%소옥홍
猪%C/EBPβ%pEGFP-N1-C/EBPβ%C2C12%表达
豬%C/EBPβ%pEGFP-N1-C/EBPβ%C2C12%錶達
저%C/EBPβ%pEGFP-N1-C/EBPβ%C2C12%표체
通过构建猪核转录因子C/EBPβ编码区真核表达体pEGFP-N1-C/EBPβ,将猪C/EBPβ异位表达于小鼠成肌细胞C2C12细胞中,为进一步研究C/EBPβ在猪脂肪发育中的调控机制奠定基础.本试验利用RT-PCR扩增C/EBPβ编码区序列并测序,提交GenBank;并将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1,通过双酶切和测序鉴定重组质粒.将重组表达体pEGFP-N1-C/EBPβ导入C2C12细胞,荧光显微镜下观察C/EBPβ在细胞中的定位,半定量RT-PCR和Western blot检测C/EBPβ在细胞中的表达情况.本试验成功克隆测序了猪C/EBPβ基因编码区序列,并首次上传到GenBank;成功构建猪C/EBPβ真核表达体pEGFP-N1-C/EBPβ,并将其异位表达.结果表明:猪C/EBPβ在脂肪组织中表达量丰富,心肌和背最长肌表达微量,并且正确插入真核表达载体pEGFP-N1,荧光显微镜下观察重组体组主要集中在细胞核;而C/EBPβ基因和蛋白在转染重组体C2C12细胞中均有表达.本研究为提高猪肉肌内脂肪含量方面的研究提供新的思路.
通過構建豬覈轉錄因子C/EBPβ編碼區真覈錶達體pEGFP-N1-C/EBPβ,將豬C/EBPβ異位錶達于小鼠成肌細胞C2C12細胞中,為進一步研究C/EBPβ在豬脂肪髮育中的調控機製奠定基礎.本試驗利用RT-PCR擴增C/EBPβ編碼區序列併測序,提交GenBank;併將其剋隆至真覈錶達載體pEGFP-N1,通過雙酶切和測序鑒定重組質粒.將重組錶達體pEGFP-N1-C/EBPβ導入C2C12細胞,熒光顯微鏡下觀察C/EBPβ在細胞中的定位,半定量RT-PCR和Western blot檢測C/EBPβ在細胞中的錶達情況.本試驗成功剋隆測序瞭豬C/EBPβ基因編碼區序列,併首次上傳到GenBank;成功構建豬C/EBPβ真覈錶達體pEGFP-N1-C/EBPβ,併將其異位錶達.結果錶明:豬C/EBPβ在脂肪組織中錶達量豐富,心肌和揹最長肌錶達微量,併且正確插入真覈錶達載體pEGFP-N1,熒光顯微鏡下觀察重組體組主要集中在細胞覈;而C/EBPβ基因和蛋白在轉染重組體C2C12細胞中均有錶達.本研究為提高豬肉肌內脂肪含量方麵的研究提供新的思路.
통과구건저핵전록인자C/EBPβ편마구진핵표체체pEGFP-N1-C/EBPβ,장저C/EBPβ이위표체우소서성기세포C2C12세포중,위진일보연구C/EBPβ재저지방발육중적조공궤제전정기출.본시험이용RT-PCR확증C/EBPβ편마구서렬병측서,제교GenBank;병장기극륭지진핵표체재체pEGFP-N1,통과쌍매절화측서감정중조질립.장중조표체체pEGFP-N1-C/EBPβ도입C2C12세포,형광현미경하관찰C/EBPβ재세포중적정위,반정량RT-PCR화Western blot검측C/EBPβ재세포중적표체정황.본시험성공극륭측서료저C/EBPβ기인편마구서렬,병수차상전도GenBank;성공구건저C/EBPβ진핵표체체pEGFP-N1-C/EBPβ,병장기이위표체.결과표명:저C/EBPβ재지방조직중표체량봉부,심기화배최장기표체미량,병차정학삽입진핵표체재체pEGFP-N1,형광현미경하관찰중조체조주요집중재세포핵;이C/EBPβ기인화단백재전염중조체C2C12세포중균유표체.본연구위제고저육기내지방함량방면적연구제공신적사로.
