CAJ | 학술논문

目的：基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR，建立快速、简便鉴定致病性大肠埃希菌相关毒素基因的方法。方法选取致病性大肠埃希菌的紧密黏附素基因（ eae）、志贺样毒素Ⅰ基因（ stx I）、志贺样毒素II基因（ stx II）和转录激活因子基因（ aggR）作为靶点。通过设计引物和Allglo探针，建立多重荧光PCR反应体系。同时，构建了4种毒素基因标准质粒，进而评价方法的特异性、灵敏性和重复性。结果基于Allglo探针技术的多重荧光PCR方法可同时准确、特异地鉴定致病性大肠埃希菌所携带的4种毒素相关基因，eae基因和aggR基因的灵敏度为10 copies/μL，stx I基因和stx II基因的灵敏度为1 copies/μL；定量检测的批间和批内变异系数均小于5%。对356份腹泻粪便样本进行评价，结果显示检出39份基因阳性。39份阳性样本中，eae基因阳性为53.85%，stxⅠ基因和stx II基因阳性为23.08%，aggR基因阳性为46.15%。通过直接测序方法进行鉴定，符合率达到100.00%。结论本实验建立的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR方法具有操作简便、特异性好和灵敏度高等特点，为致病性大肠埃希菌鉴定提供了一种快速、可靠的检测方法。
목적：기우Allglo탐침기술결합다중형광PCR，건립쾌속、간편감정치병성대장애희균상관독소기인적방법。방법선취치병성대장애희균적긴밀점부소기인（ eae）、지하양독소Ⅰ기인（ stx I）、지하양독소II기인（ stx II）화전록격활인자기인（ aggR）작위파점。통과설계인물화Allglo탐침，건립다중형광PCR반응체계。동시，구건료4충독소기인표준질립，진이평개방법적특이성、령민성화중복성。결과기우Allglo탐침기술적다중형광PCR방법가동시준학、특이지감정치병성대장애희균소휴대적4충독소상관기인，eae기인화aggR기인적령민도위10 copies/μL，stx I기인화stx II기인적령민도위1 copies/μL；정량검측적비간화비내변이계수균소우5%。대356빈복사분편양본진행평개，결과현시검출39빈기인양성。39빈양성양본중，eae기인양성위53.85%，stxⅠ기인화stx II기인양성위23.08%，aggR기인양성위46.15%。통과직접측서방법진행감정，부합솔체도100.00%。결론본실험건립적기우Allglo탐침기술결합다중형광PCR방법구유조작간편、특이성호화령민도고등특점，위치병성대장애희균감정제공료일충쾌속、가고적검측방법。