中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2014年
3期
1-7
,共7页
李宁%孟春春%梁瑞英%李传峰%陈宗艳%缪秋红%毕庄莉%朱英奇%郭慧敏%刘光清%王桂军
李寧%孟春春%樑瑞英%李傳峰%陳宗豔%繆鞦紅%畢莊莉%硃英奇%郭慧敏%劉光清%王桂軍
리저%맹춘춘%량서영%리전봉%진종염%무추홍%필장리%주영기%곽혜민%류광청%왕계군
兔出血症病毒%VP60%优势抗原区%间接ELISA
兔齣血癥病毒%VP60%優勢抗原區%間接ELISA
토출혈증병독%VP60%우세항원구%간접ELISA
Rabbit hemorrhagic disease virus%VP60 capsid protein%dominant antigen regions%indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)
为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV）抗体的间接ELISA方法，首先扩增了VP60的优势抗原区A（31~250 aa）和B（470~579 aa）两个片段，然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来，克隆至pET-30a(+)，转染BL21感受态细胞，进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定，再以纯化的AB为诊断抗原，通过对抗原-抗体反应条件的多重优化，建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明，本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB），重组蛋白的分子量约为36 kDa，该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原，成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用，证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。
為建立一種檢測兔齣血癥病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV）抗體的間接ELISA方法，首先擴增瞭VP60的優勢抗原區A（31~250 aa）和B（470~579 aa）兩箇片段，然後應用融閤PCR方法將A、B片段連接起來，剋隆至pET-30a(+)，轉染BL21感受態細胞，進行原覈錶達。用Western blot方法對錶達產物（AB）的免疫原性進行鑒定，再以純化的AB為診斷抗原，通過對抗原-抗體反應條件的多重優化，建立檢測RHDV抗體的間接ELISA方法。試驗結果錶明，本研究成功錶達瞭RHDV VP60的優勢抗原區（AB），重組蛋白的分子量約為36 kDa，該蛋白能與RHDV抗體髮生特異性反應。以純化的AB為包被抗原，成功建立瞭檢測RHDV抗體的間接ELISA方法。經過對部分田間樣品的檢測和應用，證明該方法具有特異性彊、重複性好、敏感性高等優點。本研究為將來開展RHDV的流行病學調查和疫苗研究等提供瞭良好的技術手段。
위건립일충검측토출혈증병독（Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV）항체적간접ELISA방법，수선확증료VP60적우세항원구A（31~250 aa）화B（470~579 aa）량개편단，연후응용융합PCR방법장A、B편단련접기래，극륭지pET-30a(+)，전염BL21감수태세포，진행원핵표체。용Western blot방법대표체산물（AB）적면역원성진행감정，재이순화적AB위진단항원，통과대항원-항체반응조건적다중우화，건립검측RHDV항체적간접ELISA방법。시험결과표명，본연구성공표체료RHDV VP60적우세항원구（AB），중조단백적분자량약위36 kDa，해단백능여RHDV항체발생특이성반응。이순화적AB위포피항원，성공건립료검측RHDV항체적간접ELISA방법。경과대부분전간양품적검측화응용，증명해방법구유특이성강、중복성호、민감성고등우점。본연구위장래개전RHDV적류행병학조사화역묘연구등제공료량호적기술수단。
Two dominant antigen regions of VP60 capsid protein of Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) were expressed in E. coli and used to develop an indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of serum antibodies. The dominant antigen regions A (31-250 aa) and B (470-579 aa) were amplified in overlapping PCR and sub-cloned to pET-30a(+) for transfection into BL21cells. The fusion protein AB was detected in inclusion bodies and visualized as a protein band with apparent molecular mass of 36 kDa in Western blot. The purified recombinant protein was then used as coating antigen to develop an indirect ELISA and reaction conditions were optimized. Preliminary application to clinical serum samples demonstrated repeatability, sensitivity and specificity of the ELISA method developed here, which could be used for epidemiological surveillance and vaccine development of RHDV.
