中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
9期
704-707
,共4页
吕让%王丹%宋彩玲%齐宾宾%刘明
呂讓%王丹%宋綵玲%齊賓賓%劉明
려양%왕단%송채령%제빈빈%류명
跨膜丝氨酸蛋白酶2%逆转录病毒%MDCK细胞系
跨膜絲氨痠蛋白酶2%逆轉錄病毒%MDCK細胞繫
과막사안산단백매2%역전록병독%MDCK세포계
TMPRSS2%retroviral%MDCK cell line
为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2.采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒.将逆转录病毒样颗粒感染MDCK细胞,经G418加压筛选和有限稀释法克隆及RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)等试验的鉴定,建立了稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系.此外,红细胞凝集试验和IFA结果还显示,流感病毒可以在无外源胰酶存在的条件下在该细胞系中增殖,从而为流感细胞培养型病毒株的大规模生产奠定了基础.
為建立穩定錶達跨膜絲氨痠蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK細胞繫,本研究採用RT-PCR擴增TMPRSS2基因,剋隆于逆轉錄病毒載體pLXSN中,構建重組質粒pLXSN-TMPRSS2.採用脂質體轉染的方式將重組質粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共轉染293T細胞,穫得逆轉錄病毒樣顆粒.將逆轉錄病毒樣顆粒感染MDCK細胞,經G418加壓篩選和有限稀釋法剋隆及RT-PCR和間接免疫熒光(IFA)等試驗的鑒定,建立瞭穩定錶達TMPRSS2基因的MDCK細胞繫.此外,紅細胞凝集試驗和IFA結果還顯示,流感病毒可以在無外源胰酶存在的條件下在該細胞繫中增殖,從而為流感細胞培養型病毒株的大規模生產奠定瞭基礎.
위건립은정표체과막사안산단백매2(TMPRSS2)기인적MDCK세포계,본연구채용RT-PCR확증TMPRSS2기인,극륭우역전록병독재체pLXSN중,구건중조질립pLXSN-TMPRSS2.채용지질체전염적방식장중조질립pLXSN-TMPRSS2、pGP화pE-ampho공전염293T세포,획득역전록병독양과립.장역전록병독양과립감염MDCK세포,경G418가압사선화유한희석법극륭급RT-PCR화간접면역형광(IFA)등시험적감정,건립료은정표체TMPRSS2기인적MDCK세포계.차외,홍세포응집시험화IFA결과환현시,류감병독가이재무외원이매존재적조건하재해세포계중증식,종이위류감세포배양형병독주적대규모생산전정료기출.
