中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
9期
688-691
,共4页
田秋丰%于申业%衣菲%倪宏波%吕雪莲%刘思国
田鞦豐%于申業%衣菲%倪宏波%呂雪蓮%劉思國
전추봉%우신업%의비%예굉파%려설련%류사국
单核细胞增生李斯特茵%prfA基因%温控表达%荧光蛋白
單覈細胞增生李斯特茵%prfA基因%溫控錶達%熒光蛋白
단핵세포증생리사특인%prfA기인%온공표체%형광단백
Listeria monocytogenes%prfA gene%thermoregulated expression%fluorescent protein
单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed)基因分别插入到pET-28a和pUC19载体中,构建重组质粒pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型原核细胞表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.
單覈細胞增生李斯特茵的prfA基因編碼一箇溫度控製啟動蛋白,具有在37℃條件下啟動下遊基因錶達的功能.為構建新型原覈溫控誘導錶達載體,本研究利用PCR方法擴增prfA基因,併將其與綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(DsRed)基因分彆插入到pET-28a和pUC19載體中,構建重組質粒pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed.將重組質粒轉化大腸桿菌DH5α,在37℃條件下培養,利用激光共聚焦顯微鏡觀測細菌中熒光蛋白的錶達情況.結果錶明,構建的兩種重組質粒的熒光蛋白基因于37℃條件下,在受體茵中均穫得有效錶達,而30℃時則僅有微弱的本底熒光蛋白錶達.本研究構建瞭以最適生理溫度為單一誘導條件的溫控錶達的新型原覈細胞錶達載體,為蛋白的錶達與功能研究提供瞭新的平檯.
단핵세포증생리사특인적prfA기인편마일개온도공제계동단백,구유재37℃조건하계동하유기인표체적공능.위구건신형원핵온공유도표체재체,본연구이용PCR방법확증prfA기인,병장기여록색형광단백(GFP)혹홍색형광단백(DsRed)기인분별삽입도pET-28a화pUC19재체중,구건중조질립pET-prfA-EGFP화pUC-prfA-DsRed.장중조질립전화대장간균DH5α,재37℃조건하배양,이용격광공취초현미경관측세균중형광단백적표체정황.결과표명,구건적량충중조질립적형광단백기인우37℃조건하,재수체인중균획득유효표체,이30℃시칙부유미약적본저형광단백표체.본연구구건료이최괄생리온도위단일유도조건적온공표체적신형원핵세포표체재체,위단백적표체여공능연구제공료신적평태.
