遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2014年
3期
304-307
,共4页
梁大敏%束波%杨加伟%生欣%范芳
樑大敏%束波%楊加偉%生訢%範芳
량대민%속파%양가위%생흔%범방
DNA依赖性蛋白激酶亚基%RNA干扰%BEL7402/5-FU%多药耐药%P-糖蛋白
DNA依賴性蛋白激酶亞基%RNA榦擾%BEL7402/5-FU%多藥耐藥%P-糖蛋白
DNA의뢰성단백격매아기%RNA간우%BEL7402/5-FU%다약내약%P-당단백
目的 观察shDNA-PKcs沉默DNA-PKcs基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU耐药性的影响.方法 采用双酶切、测序分析鉴定shDNA-PKcs干扰质粒;用阳离子脂质体法将shDNA-PKcs质粒转染BEL7402/5-FU细胞,根据荧光细胞数计算转染率,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测细胞药物敏感性;Real-time PCR和Westernblot检测P-gp mRNA和蛋白表达.结果 双酶切鉴定结果显示质粒约为6300bp,测序结果显示插入序列为shDNA-PKcs序列.荧光细胞计数显示质粒的转染率为62.2％.Real time PCR及Western blot检测结果显示DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6％、71.8％;MTT检测结果显示shDNA-PKcs实验组的ADM和5-FU的IC50值比对照组ADM、5-FU低(P＜0.05),DDP和MMC的IC50值与对照组比无统计学意义(P＞0.05).Real time PCR和Western blot检测结果显示实验组P-gp mRNA、蛋白表达水平均比对照组低(P＜0.01).结论 shDNA-PKcs干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中DNA-PKcs表达,增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与P-gp蛋白的下调有关.
目的 觀察shDNA-PKcs沉默DNA-PKcs基因對肝癌耐藥細胞Bel7402/5-FU耐藥性的影響.方法 採用雙酶切、測序分析鑒定shDNA-PKcs榦擾質粒;用暘離子脂質體法將shDNA-PKcs質粒轉染BEL7402/5-FU細胞,根據熒光細胞數計算轉染率,Real-time PCR及Western blot檢測沉默效率;MTT法檢測細胞藥物敏感性;Real-time PCR和Westernblot檢測P-gp mRNA和蛋白錶達.結果 雙酶切鑒定結果顯示質粒約為6300bp,測序結果顯示插入序列為shDNA-PKcs序列.熒光細胞計數顯示質粒的轉染率為62.2％.Real time PCR及Western blot檢測結果顯示DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分彆為82.6％、71.8％;MTT檢測結果顯示shDNA-PKcs實驗組的ADM和5-FU的IC50值比對照組ADM、5-FU低(P＜0.05),DDP和MMC的IC50值與對照組比無統計學意義(P＞0.05).Real time PCR和Western blot檢測結果顯示實驗組P-gp mRNA、蛋白錶達水平均比對照組低(P＜0.01).結論 shDNA-PKcs榦擾質粒能夠有效抑製BEL7402/5-FU細胞中DNA-PKcs錶達,增加細胞對化療藥物的敏感性,其機製可能與P-gp蛋白的下調有關.
목적 관찰shDNA-PKcs침묵DNA-PKcs기인대간암내약세포Bel7402/5-FU내약성적영향.방법 채용쌍매절、측서분석감정shDNA-PKcs간우질립;용양리자지질체법장shDNA-PKcs질립전염BEL7402/5-FU세포,근거형광세포수계산전염솔,Real-time PCR급Western blot검측침묵효솔;MTT법검측세포약물민감성;Real-time PCR화Westernblot검측P-gp mRNA화단백표체.결과 쌍매절감정결과현시질립약위6300bp,측서결과현시삽입서렬위shDNA-PKcs서렬.형광세포계수현시질립적전염솔위62.2％.Real time PCR급Western blot검측결과현시DNA-PKcs mRNA급단백수평적침묵효솔분별위82.6％、71.8％;MTT검측결과현시shDNA-PKcs실험조적ADM화5-FU적IC50치비대조조ADM、5-FU저(P＜0.05),DDP화MMC적IC50치여대조조비무통계학의의(P＞0.05).Real time PCR화Western blot검측결과현시실험조P-gp mRNA、단백표체수평균비대조조저(P＜0.01).결론 shDNA-PKcs간우질립능구유효억제BEL7402/5-FU세포중DNA-PKcs표체,증가세포대화료약물적민감성,기궤제가능여P-gp단백적하조유관.
