安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
19期
6163-6165
,共3页
遇文婧%刘志华%王志英%古丽吉米拉米吉提%黄颖%刁桂萍
遇文婧%劉誌華%王誌英%古麗吉米拉米吉提%黃穎%刁桂萍
우문청%류지화%왕지영%고려길미랍미길제%황영%조계평
深绿木霉ACCC30153%刺激植物响应蛋白%毕赤酵母
深綠木黴ACCC30153%刺激植物響應蛋白%畢赤酵母
심록목매ACCC30153%자격식물향응단백%필적효모
Trichoderma atroviride ACCC30153%Eliciting plant response protein%P.pastoris
[目的]构建刺激植物响应蛋白Epll基因的真核表达载体,筛选多拷贝酵母转化子.[方法]以深绿木霉(Trichoderma atroviride)ACCC30153的cDNA为模板进行PCR获得Epl1基因片段,并将目的片段插入表达载体pPIC9K的相应位置,获得重组表达载体,并将pPIC9K-Epl1转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,并用不同中终浓度的遗传霉素G418筛选多拷贝重组酵母菌株.[结果]对重组载体进行PCR及双酶切检测为阳性;在含有终浓度为2 mg/ml遗传霉素G418的YPD平板上筛选得到7株多拷贝的转化子GS115-Epl1,经PCR鉴定1株转化子呈阳性.[结论]Epl1基因的我体构建及多拷贝酵母转化子筛选为以后大量分离纯化Epl1蛋白并研究其功能奠定基础.
[目的]構建刺激植物響應蛋白Epll基因的真覈錶達載體,篩選多拷貝酵母轉化子.[方法]以深綠木黴(Trichoderma atroviride)ACCC30153的cDNA為模闆進行PCR穫得Epl1基因片段,併將目的片段插入錶達載體pPIC9K的相應位置,穫得重組錶達載體,併將pPIC9K-Epl1轉入畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,併用不同中終濃度的遺傳黴素G418篩選多拷貝重組酵母菌株.[結果]對重組載體進行PCR及雙酶切檢測為暘性;在含有終濃度為2 mg/ml遺傳黴素G418的YPD平闆上篩選得到7株多拷貝的轉化子GS115-Epl1,經PCR鑒定1株轉化子呈暘性.[結論]Epl1基因的我體構建及多拷貝酵母轉化子篩選為以後大量分離純化Epl1蛋白併研究其功能奠定基礎.
[목적]구건자격식물향응단백Epll기인적진핵표체재체,사선다고패효모전화자.[방법]이심록목매(Trichoderma atroviride)ACCC30153적cDNA위모판진행PCR획득Epl1기인편단,병장목적편단삽입표체재체pPIC9K적상응위치,획득중조표체재체,병장pPIC9K-Epl1전입필적효모(Pichia pastoris)GS115중,병용불동중종농도적유전매소G418사선다고패중조효모균주.[결과]대중조재체진행PCR급쌍매절검측위양성;재함유종농도위2 mg/ml유전매소G418적YPD평판상사선득도7주다고패적전화자GS115-Epl1,경PCR감정1주전화자정양성.[결론]Epl1기인적아체구건급다고패효모전화자사선위이후대량분리순화Epl1단백병연구기공능전정기출.
