河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
5期
124-129
,共6页
武振江%刘佳%崔波%叶永忠
武振江%劉佳%崔波%葉永忠
무진강%류가%최파%협영충
文心兰%载体构建%OnAP1基因%遗传转化体系
文心蘭%載體構建%OnAP1基因%遺傳轉化體繫
문심란%재체구건%OnAP1기인%유전전화체계
Oncidium%vector construction%OnAP1 gene%genetic transformation system
根据NCBI网站上文心兰OnAP1-like基因序列设计引物,用RT-PCR法从南茜文心兰花葶中扩增OnAP1-like基因,对扩增产物进行测序.结果表明,获得的南茜文心兰OnAP1-like基因为690 bp,与报道序列完全一致.将OnAP1-like基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-OnAP1.对OnAP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的三维结构.结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,所表达蛋白为亲水性蛋白.确定了一种文心兰的遗传转化条件,得到筛选抗生素G418的最适质量浓度为40mg/L,为进一步研究文心兰中AP1基因的功能奠定基础.
根據NCBI網站上文心蘭OnAP1-like基因序列設計引物,用RT-PCR法從南茜文心蘭花葶中擴增OnAP1-like基因,對擴增產物進行測序.結果錶明,穫得的南茜文心蘭OnAP1-like基因為690 bp,與報道序列完全一緻.將OnAP1-like基因插入pRI101-ON載體中,經PCR、雙酶切及測序鑒定,證實重組錶達質粒中含有目的片段,錶明成功構建瞭高效植物錶達載體pRI101-OnAP1.對OnAP1-like基因的結構域和所錶達蛋白質的親水性進行瞭分析,併預測瞭該基因所錶達蛋白的三維結構.結果顯示,該基因包含MADS-box和K-box保守域,屬于MADS-box基因傢族,所錶達蛋白為親水性蛋白.確定瞭一種文心蘭的遺傳轉化條件,得到篩選抗生素G418的最適質量濃度為40mg/L,為進一步研究文心蘭中AP1基因的功能奠定基礎.
근거NCBI망참상문심란OnAP1-like기인서렬설계인물,용RT-PCR법종남천문심란화정중확증OnAP1-like기인,대확증산물진행측서.결과표명,획득적남천문심란OnAP1-like기인위690 bp,여보도서렬완전일치.장OnAP1-like기인삽입pRI101-ON재체중,경PCR、쌍매절급측서감정,증실중조표체질립중함유목적편단,표명성공구건료고효식물표체재체pRI101-OnAP1.대OnAP1-like기인적결구역화소표체단백질적친수성진행료분석,병예측료해기인소표체단백적삼유결구.결과현시,해기인포함MADS-box화K-box보수역,속우MADS-box기인가족,소표체단백위친수성단백.학정료일충문심란적유전전화조건,득도사선항생소G418적최괄질량농도위40mg/L,위진일보연구문심란중AP1기인적공능전정기출.
