中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2014年
6期
568-574
,共7页
余源%葛爽%李明%刘阿倩%林志强%田喜凤
餘源%葛爽%李明%劉阿倩%林誌彊%田喜鳳
여원%갈상%리명%류아천%림지강%전희봉
C2株蓝氏贾第鞭毛虫%克隆%表达%同源性分析%分子进化树
C2株藍氏賈第鞭毛蟲%剋隆%錶達%同源性分析%分子進化樹
C2주람씨가제편모충%극륭%표체%동원성분석%분자진화수
C2 Giardia lamblia%cloning%expression%homology analysis%phylogenetic tree
目的 克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫进行同源分析,构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树.方法 PCR扩增获取H3组蛋白基因,构建pGM-T-H3重组载体,转化E.coli TOP10感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,利用限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ构建pET28a(+)-H3重组载体,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导组蛋白H3表达,Western blotting鉴定表达,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H3组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析.结果 成功克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,同源比对结果显示C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因序列与美国WB株完全一致,但与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远.结论 C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树分析表明贾第虫H3组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早,本研究结果为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的实验资料.
目的 剋隆錶達C2株藍氏賈第鞭毛蟲H3組蛋白基因,與WB株藍氏賈第鞭毛蟲進行同源分析,構建C2株藍氏賈第鞭毛蟲H3組蛋白分子進化樹.方法 PCR擴增穫取H3組蛋白基因,構建pGM-T-H3重組載體,轉化E.coli TOP10感受態宿主細胞,挑選暘性剋隆併進行序列分析,利用限製性內切酶NcoⅠ和XhoⅠ構建pET28a(+)-H3重組載體,轉化E.coli Rosetta(DE3),IPTG誘導組蛋白H3錶達,Western blotting鑒定錶達,與美國WB株藍氏賈第鞭毛蟲及模式生物H3組蛋白基因和蛋白序列進行同源分析.結果 成功剋隆錶達C2株藍氏賈第鞭毛蟲H3組蛋白基因,同源比對結果顯示C2株藍氏賈第鞭毛蟲基因序列與美國WB株完全一緻,但與其他現存真覈生物親緣關繫較為疏遠.結論 C2株藍氏賈第鞭毛蟲H3組蛋白分子進化樹分析錶明賈第蟲H3組蛋白基因在進化過程中與其他物種分化較早,本研究結果為進一步研究藍氏賈第鞭毛蟲的生物進化地位提供有價值的實驗資料.
목적 극륭표체C2주람씨가제편모충H3조단백기인,여WB주람씨가제편모충진행동원분석,구건C2주람씨가제편모충H3조단백분자진화수.방법 PCR확증획취H3조단백기인,구건pGM-T-H3중조재체,전화E.coli TOP10감수태숙주세포,도선양성극륭병진행서렬분석,이용한제성내절매NcoⅠ화XhoⅠ구건pET28a(+)-H3중조재체,전화E.coli Rosetta(DE3),IPTG유도조단백H3표체,Western blotting감정표체,여미국WB주람씨가제편모충급모식생물H3조단백기인화단백서렬진행동원분석.결과 성공극륭표체C2주람씨가제편모충H3조단백기인,동원비대결과현시C2주람씨가제편모충기인서렬여미국WB주완전일치,단여기타현존진핵생물친연관계교위소원.결론 C2주람씨가제편모충H3조단백분자진화수분석표명가제충H3조단백기인재진화과정중여기타물충분화교조,본연구결과위진일보연구람씨가제편모충적생물진화지위제공유개치적실험자료.
