中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2014年
11期
5-9
,共5页
李芳%罗军%余康%许会芬%石恒波%朱江江
李芳%囉軍%餘康%許會芬%石恆波%硃江江
리방%라군%여강%허회분%석항파%주강강
ADRP%原核表达%亲和纯化%多克隆抗体%羊
ADRP%原覈錶達%親和純化%多剋隆抗體%羊
ADRP%원핵표체%친화순화%다극륭항체%양
ADRP%prokaryotic expression%affinity purification%polyclonal antibody%goat
在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP),并制备其多克隆抗体.以实验室保存的pMD 19-T-A DRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a(+)载体,阳性克隆转化到大肠杆菌菌株E.coli BL21 (DE3)中诱导表达,优化融合蛋白表达条件,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的ADRP蛋白经复性后免疫兔子制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果表明:成功构建pET32a(+)-ADRP原核表达载体并诱导其表达,获得最佳表达条件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h;ELISA检测显示抗体效价达1∶64 000;经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性结合原核表达以及乳腺上皮细胞表达的ADRP蛋白.本实验成功表达、纯化了ADRP融合蛋白,获得具高特异性、高效价的兔抗ADRP多克隆抗体.
在大腸桿菌中錶達西農薩能羊脂肪分化相關蛋白(ADRP),併製備其多剋隆抗體.以實驗室保存的pMD 19-T-A DRP質粒為模闆,擴增ADRP的CDS區,將其剋隆到pET32a(+)載體,暘性剋隆轉化到大腸桿菌菌株E.coli BL21 (DE3)中誘導錶達,優化融閤蛋白錶達條件,使用Ni-NTA親和層析柱純化融閤蛋白,純化的ADRP蛋白經複性後免疫兔子製備多剋隆抗體,ELISA和Western blot檢測血清效價和特異性.結果錶明:成功構建pET32a(+)-ADRP原覈錶達載體併誘導其錶達,穫得最佳錶達條件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG誘導6 h;ELISA檢測顯示抗體效價達1∶64 000;經Western blot鑒定,製備的多剋隆抗體能特異性結閤原覈錶達以及乳腺上皮細胞錶達的ADRP蛋白.本實驗成功錶達、純化瞭ADRP融閤蛋白,穫得具高特異性、高效價的兔抗ADRP多剋隆抗體.
재대장간균중표체서농살능양지방분화상관단백(ADRP),병제비기다극륭항체.이실험실보존적pMD 19-T-A DRP질립위모판,확증ADRP적CDS구,장기극륭도pET32a(+)재체,양성극륭전화도대장간균균주E.coli BL21 (DE3)중유도표체,우화융합단백표체조건,사용Ni-NTA친화층석주순화융합단백,순화적ADRP단백경복성후면역토자제비다극륭항체,ELISA화Western blot검측혈청효개화특이성.결과표명:성공구건pET32a(+)-ADRP원핵표체재체병유도기표체,획득최가표체조건,즉37℃、0.5 mmol/L IPTG유도6 h;ELISA검측현시항체효개체1∶64 000;경Western blot감정,제비적다극륭항체능특이성결합원핵표체이급유선상피세포표체적ADRP단백.본실험성공표체、순화료ADRP융합단백,획득구고특이성、고효개적토항ADRP다극륭항체.
