基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2014年
6期
834-839
,共6页
韩为%林细华%阴彬%彭小忠
韓為%林細華%陰彬%彭小忠
한위%림세화%음빈%팽소충
PCBP2%microRNA%RIP-Chip%神经胶质瘤
PCBP2%microRNA%RIP-Chip%神經膠質瘤
PCBP2%microRNA%RIP-Chip%신경효질류
PCBP2%microRNA%RIP-Chip%glioma
目的 通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA).方法 选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达.用兔IgG作为阴性对照,收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品,通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果,利用NanoDrop定量并经Agilent2100检测RNA完整性.选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交,筛选富集4倍以上且P＜0.05的miRNA.结果 用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验,最终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA,1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA;其中15条存在PCBP2的结合位点.结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA.
目的 通過覈糖覈蛋白免疫沉澱-芯片技術(RIP-Chip)在人正常神經膠質細胞(HA)和神經膠質瘤細胞(T98G和U87MG)中篩選與多聚胞嘧啶結閤蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA).方法 選擇兔抗人PCBP2抗體,用Western blot法檢測PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG細胞中的錶達.用兔IgG作為陰性對照,收集3種細胞的RIP蛋白和RNA樣品,通過Western blot檢測PCBP2蛋白富集效果,利用NanoDrop定量併經Agilent2100檢測RNA完整性.選擇Affymetrix miRNA 3.0芯片對RNA樣品進行雜交,篩選富集4倍以上且P＜0.05的miRNA.結果 用PCBP2抗體進行RIP-Chip實驗,最終篩選和PCBP2相互作用的103條miRNA,1條前體miRNA和1條覈仁小分子RNA;其中15條存在PCBP2的結閤位點.結論 PCBP2可以通過識彆靶序列或者以覈糖覈蛋白複閤物形式在細胞內結閤成熟的miRNA、前體miRNA或覈仁小分子RNA.
목적 통과핵당핵단백면역침정-심편기술(RIP-Chip)재인정상신경효질세포(HA)화신경효질류세포(T98G화U87MG)중사선여다취포밀정결합단백2(PCBP2)상호작용적microRNA(miRNA).방법 선택토항인PCBP2항체,용Western blot법검측PCBP2단백재HA、T98G화U87MG세포중적표체.용토IgG작위음성대조,수집3충세포적RIP단백화RNA양품,통과Western blot검측PCBP2단백부집효과,이용NanoDrop정량병경Agilent2100검측RNA완정성.선택Affymetrix miRNA 3.0심편대RNA양품진행잡교,사선부집4배이상차P＜0.05적miRNA.결과 용PCBP2항체진행RIP-Chip실험,최종사선화PCBP2상호작용적103조miRNA,1조전체miRNA화1조핵인소분자RNA;기중15조존재PCBP2적결합위점.결론 PCBP2가이통과식별파서렬혹자이핵당핵단백복합물형식재세포내결합성숙적miRNA、전체miRNA혹핵인소분자RNA.
