吉首大学学报（自然科学版）
吉首大學學報（自然科學版）
길수대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF JISHOU UNIVERSITY
2014年
2期
73-78
,共6页
史辉%黄其梅%叶美娜%阮少江%陈勇
史輝%黃其梅%葉美娜%阮少江%陳勇
사휘%황기매%협미나%원소강%진용
爱玉%ISSR%反应体系%正交设计
愛玉%ISSR%反應體繫%正交設計
애옥%ISSR%반응체계%정교설계
通过单因子试验和正交设计,对影响爱玉ISSR-PCR扩增效果的因素,如模板DNA用量、Taq酶周量、dNTPs浓度、引物浓度、延伸时间和循环次数等指标进行优化.实验确立了可用于爱玉ISSR-PCR分析最适宜的反应体系:20 μL反应体积中含1 ng模板DNA、1.0 UTaq酶、0.4 μmol/L引物和0.18 mmol/L dNTPs; PCR扩增程序为94℃顸变性4 min;94℃变性45 s,53℃退火45 s,72℃延伸2.5 min,共35个循环;72℃延伸7min,4℃保存.应用该体系对14份爱玉种质进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.
通過單因子試驗和正交設計,對影響愛玉ISSR-PCR擴增效果的因素,如模闆DNA用量、Taq酶週量、dNTPs濃度、引物濃度、延伸時間和循環次數等指標進行優化.實驗確立瞭可用于愛玉ISSR-PCR分析最適宜的反應體繫:20 μL反應體積中含1 ng模闆DNA、1.0 UTaq酶、0.4 μmol/L引物和0.18 mmol/L dNTPs; PCR擴增程序為94℃頇變性4 min;94℃變性45 s,53℃退火45 s,72℃延伸2.5 min,共35箇循環;72℃延伸7min,4℃保存.應用該體繫對14份愛玉種質進行擴增,證實瞭該體繫的適用性和穩定性.
통과단인자시험화정교설계,대영향애옥ISSR-PCR확증효과적인소,여모판DNA용량、Taq매주량、dNTPs농도、인물농도、연신시간화순배차수등지표진행우화.실험학립료가용우애옥ISSR-PCR분석최괄의적반응체계:20 μL반응체적중함1 ng모판DNA、1.0 UTaq매、0.4 μmol/L인물화0.18 mmol/L dNTPs; PCR확증정서위94℃한변성4 min;94℃변성45 s,53℃퇴화45 s,72℃연신2.5 min,공35개순배;72℃연신7min,4℃보존.응용해체계대14빈애옥충질진행확증,증실료해체계적괄용성화은정성.
