中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2014年
5期
685-690
,共6页
廖长秀%吴勇%平洁%敖英%印宪%汪晖
廖長秀%吳勇%平潔%敖英%印憲%汪暉
료장수%오용%평길%오영%인헌%왕휘
CYP450 亚型%外源物%肝星状细胞%细胞活化
CYP450 亞型%外源物%肝星狀細胞%細胞活化
CYP450 아형%외원물%간성상세포%세포활화
CYP450 isoforms%xenobiotics%hepatic stellate cells%cell activation
目的：观察大鼠肝星状细胞（HSC）活化不同时期外源活化相关 CYP450亚型CYP1A1， CYP1B1，CYP1A2，CYP2B1/2和 CYP2E1 mRNA 表达水平的变化规律。方法分离大鼠 HSC，接种在无包被塑料培养瓶中作为 HSC 自氧化活化模型，免疫细胞化学法检测不同培养时间 HSC 活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。实时定量 RT-PCR 法测定 HSC 自氧化激活的不同时期多种外源物活化相关 CYP450亚型 mRNA 的表达变化。结果免疫细胞化学结果表明，在塑料培养瓶中培养1 d 的 HSC 并不表达α-SMA，但随着培养时间的延长，α-SMA 表达逐渐增强，培养11 d 的 HSC 处于完全活化状态，能表达典型肌丝条纹和较强α-SMA，说明培养1，2，5和11 d 的 HSC 分别处于未活化期、活化早期、中期和晚期。实时定量 RT-PCR 结果显示，在未活化的 HSC（培养1 d）中，有 CYP1A1， CYP1B1， CYP1A2， CYP2B1/2和 CYP2E1的 mRNA 表达；在 HSC 活化早期（培养2 d），CYP1B1，CYP2B1/2，CYP2E1 mRNA 表达最高，分别为未活化 HSC 的2.1，1.6（P﹤0.05）和23.9（P﹤0.01）倍；而在活化中期（培养5 d）及晚期（培养11 d），这些 CYP 亚型表达显著降低甚至测不出。然而，CYP1A1和 CYP1A2在整个活化过程均持续下降。结论多种外源物活化相关 CYP450亚型在 HSC 自氧化激活过程发生了明显改变，其中CYP1B1，CYP2B1/2和 CYP2E1的 mRNA 表达在活化早期显著升高，这些变化可能与 HSC 的早期激活增殖有关。
目的：觀察大鼠肝星狀細胞（HSC）活化不同時期外源活化相關 CYP450亞型CYP1A1， CYP1B1，CYP1A2，CYP2B1/2和 CYP2E1 mRNA 錶達水平的變化規律。方法分離大鼠 HSC，接種在無包被塑料培養瓶中作為 HSC 自氧化活化模型，免疫細胞化學法檢測不同培養時間 HSC 活化標誌物α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）錶達。實時定量 RT-PCR 法測定 HSC 自氧化激活的不同時期多種外源物活化相關 CYP450亞型 mRNA 的錶達變化。結果免疫細胞化學結果錶明，在塑料培養瓶中培養1 d 的 HSC 併不錶達α-SMA，但隨著培養時間的延長，α-SMA 錶達逐漸增彊，培養11 d 的 HSC 處于完全活化狀態，能錶達典型肌絲條紋和較彊α-SMA，說明培養1，2，5和11 d 的 HSC 分彆處于未活化期、活化早期、中期和晚期。實時定量 RT-PCR 結果顯示，在未活化的 HSC（培養1 d）中，有 CYP1A1， CYP1B1， CYP1A2， CYP2B1/2和 CYP2E1的 mRNA 錶達；在 HSC 活化早期（培養2 d），CYP1B1，CYP2B1/2，CYP2E1 mRNA 錶達最高，分彆為未活化 HSC 的2.1，1.6（P﹤0.05）和23.9（P﹤0.01）倍；而在活化中期（培養5 d）及晚期（培養11 d），這些 CYP 亞型錶達顯著降低甚至測不齣。然而，CYP1A1和 CYP1A2在整箇活化過程均持續下降。結論多種外源物活化相關 CYP450亞型在 HSC 自氧化激活過程髮生瞭明顯改變，其中CYP1B1，CYP2B1/2和 CYP2E1的 mRNA 錶達在活化早期顯著升高，這些變化可能與 HSC 的早期激活增殖有關。
목적：관찰대서간성상세포（HSC）활화불동시기외원활화상관 CYP450아형CYP1A1， CYP1B1，CYP1A2，CYP2B1/2화 CYP2E1 mRNA 표체수평적변화규률。방법분리대서 HSC，접충재무포피소료배양병중작위 HSC 자양화활화모형，면역세포화학법검측불동배양시간 HSC 활화표지물α-평활기기동단백（α-SMA）표체。실시정량 RT-PCR 법측정 HSC 자양화격활적불동시기다충외원물활화상관 CYP450아형 mRNA 적표체변화。결과면역세포화학결과표명，재소료배양병중배양1 d 적 HSC 병불표체α-SMA，단수착배양시간적연장，α-SMA 표체축점증강，배양11 d 적 HSC 처우완전활화상태，능표체전형기사조문화교강α-SMA，설명배양1，2，5화11 d 적 HSC 분별처우미활화기、활화조기、중기화만기。실시정량 RT-PCR 결과현시，재미활화적 HSC（배양1 d）중，유 CYP1A1， CYP1B1， CYP1A2， CYP2B1/2화 CYP2E1적 mRNA 표체；재 HSC 활화조기（배양2 d），CYP1B1，CYP2B1/2，CYP2E1 mRNA 표체최고，분별위미활화 HSC 적2.1，1.6（P﹤0.05）화23.9（P﹤0.01）배；이재활화중기（배양5 d）급만기（배양11 d），저사 CYP 아형표체현저강저심지측불출。연이，CYP1A1화 CYP1A2재정개활화과정균지속하강。결론다충외원물활화상관 CYP450아형재 HSC 자양화격활과정발생료명현개변，기중CYP1B1，CYP2B1/2화 CYP2E1적 mRNA 표체재활화조기현저승고，저사변화가능여 HSC 적조기격활증식유관。
OBJECTIVE To investigate the role of several xenobiotic metabolism-associated CYP450 isoforms in the auto-activation of hepatic stellate cells(HSCs) invitro. METHODS HSCs were isolated from adult Wistar rats and cultured on plastic as an in vitroauto-activation model. Positive expression of α-smooth muscle actin(α-SMA)was used as an activated marker of HSCs and detected by immunocytochemical staining in HSCs cultured for 1,2,5 or 11 d. The expressions of CYP450 isoforms were analyzed by real-time RT-PCR in the HSCs. RESULTS The immunocytochemical stai-ning showed no α-SMA expression in HSCs cultured for 1 d,while its expression gradually increased during culture since day 2. ln terms of α-SMA expression,HSCs cultured for 1,2,5,and 11 d were classified as the quiescent,early,middle and later stages of activation,respectively. The RT-PCR results revealed that CYP1B1,CYP2B1/ 2,and CYP2E1 mRNA were expressed at high levels in the early stage of HSCs activation(at day 2),which were 2.1-,1.6-,and 23.9-fold those in the quiescent HSCs(day 1),respectively. Further study revealed that mRNA expressions of these up-regulated CYPs in the early stage of activation were diminished at the subsequent two stages. The levels of CYP1A1 and CYP1A2 mRNA decreased constantly throughtout the activation process. CONCLUSION Multiple xenobi-otic metabolism-associated CYP450 isoforms might be involved in the auto-activation of rat HSCs invitro.
