畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
4期
36-40
,共5页
PRRSV%重组蛋白tGP5%原核表达%间接ELISA
PRRSV%重組蛋白tGP5%原覈錶達%間接ELISA
PRRSV%중조단백tGP5%원핵표체%간접ELISA
PRRSV%recombinant tGP5 protein%prokaryotic expression%indirect ELISA
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系.为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行原核表达,以表达的重组蛋白tGP5为包被抗原建立了检测针对GP5蛋白抗体的ELISA方法,优化后反应条件为:抗原包被浓度2μg/mL,37℃包被2h,5％脱脂乳37℃封闭2h,待检血清稀释度1∶100,37℃作用1h,二抗1∶20000稀释,37℃作用45 min,37℃显色3 min,抗体临界值OD450mm≥0.22判为阳性,OD450nm＜0.183判为阴性,介于两者之间为可疑.特异性和重复性试验证明,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫病毒血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好.
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)感染主要引起母豬繁殖障礙和新生仔豬呼吸道癥狀,目前尚無有效的血清學檢測方法評價豬群疫苗免疫或感染後抗體水平與免疫保護力之間的關繫.為建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究選擇GP5蛋白親水區進行原覈錶達,以錶達的重組蛋白tGP5為包被抗原建立瞭檢測針對GP5蛋白抗體的ELISA方法,優化後反應條件為:抗原包被濃度2μg/mL,37℃包被2h,5％脫脂乳37℃封閉2h,待檢血清稀釋度1∶100,37℃作用1h,二抗1∶20000稀釋,37℃作用45 min,37℃顯色3 min,抗體臨界值OD450mm≥0.22判為暘性,OD450nm＜0.183判為陰性,介于兩者之間為可疑.特異性和重複性試驗證明,與豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環病毒2型、豬口蹄疫病毒血清抗體無交扠反應,批內、批間重複性較好.
저번식여호흡종합정병독(PRRSV)감염주요인기모저번식장애화신생자저호흡도증상,목전상무유효적혈청학검측방법평개저군역묘면역혹감염후항체수평여면역보호력지간적관계.위건립PRRSV GP5단백적ELISA방법,본연구선택GP5단백친수구진행원핵표체,이표체적중조단백tGP5위포피항원건립료검측침대GP5단백항체적ELISA방법,우화후반응조건위:항원포피농도2μg/mL,37℃포피2h,5％탈지유37℃봉폐2h,대검혈청희석도1∶100,37℃작용1h,이항1∶20000희석,37℃작용45 min,37℃현색3 min,항체림계치OD450mm≥0.22판위양성,OD450nm＜0.183판위음성,개우량자지간위가의.특이성화중복성시험증명,여저온병독、저위광견병독、저원배병독2형、저구제역병독혈청항체무교차반응,비내、비간중복성교호.
