中国油料作物学报
中國油料作物學報
중국유료작물학보
CHINESE JOURNAL OF OIL CROP SCIENCES
2014年
3期
329-333
,共5页
崔喜艳%董雅致%刘晓庆%张治安
崔喜豔%董雅緻%劉曉慶%張治安
최희염%동아치%류효경%장치안
栽培大豆%rbcS%基因克隆%原核表达
栽培大豆%rbcS%基因剋隆%原覈錶達
재배대두%rbcS%기인극륭%원핵표체
Glycine max%rbcS%Gene cloning%Prokaryotic expression
根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcS的cDNA.将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,双酶切鉴定后筛选阳性克隆,测序结果显示:rbcS全长696bp,其中开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸;选择含大豆rbcS cDNA阳性克隆菌液IPTG诱导,经SDS-PAGE分析,诱导表达出分子量为29.1 kDa的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7h蛋白表达量最高,为64.15％.
根據NCBI中髮錶的大豆Rubisco小亞基基因(rbcS)序列(AF303939-1)設計特異引物,以吉農13大豆為實驗材料,採用Trizol法提取葉片總RNA,通過RT-PCR剋隆大豆rbcS的cDNA.將該基因與原覈錶達載體pET-30a(+)連接,轉化大腸桿菌E.coli BL21感受態細胞,雙酶切鑒定後篩選暘性剋隆,測序結果顯示:rbcS全長696bp,其中開放閱讀框為537bp,編碼178箇氨基痠;選擇含大豆rbcS cDNA暘性剋隆菌液IPTG誘導,經SDS-PAGE分析,誘導錶達齣分子量為29.1 kDa的融閤蛋白,錶達產物大小與預計理論值相符.誘導7h蛋白錶達量最高,為64.15％.
근거NCBI중발표적대두Rubisco소아기기인(rbcS)서렬(AF303939-1)설계특이인물,이길농13대두위실험재료,채용Trizol법제취협편총RNA,통과RT-PCR극륭대두rbcS적cDNA.장해기인여원핵표체재체pET-30a(+)련접,전화대장간균E.coli BL21감수태세포,쌍매절감정후사선양성극륭,측서결과현시:rbcS전장696bp,기중개방열독광위537bp,편마178개안기산;선택함대두rbcS cDNA양성극륭균액IPTG유도,경SDS-PAGE분석,유도표체출분자량위29.1 kDa적융합단백,표체산물대소여예계이론치상부.유도7h단백표체량최고,위64.15％.
