CAJ | 학술논문

本研究观察人树突状细胞(dendritic cells,DC)来源的外泌体(DC-derived exosome,DCex)对人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)成骨分化的影响.采用超速离心法从树突状细胞培养上清中获取DCex,应用电子显微镜观察DCex形态并通过流式细胞术检测和鉴定其细胞来源.取第3代MSC,设3组培养诱导体系:①对照组:α-MEM基础培养液组;②实验组:α-MEM基础培养液+DCex(10 μg/ml)组;③α-MEM基础培养液+标准诱导剂组.采用荧光实时定量PCR、琼脂糖凝胶电泳检测各组成骨分化转录因子Runx2 mRNA的表达情况,并进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.另外,荧光染料DiI标记DCex,应用共聚焦显微镜观察DCex进入MSC的过程.结果显示,在电子显微镜下DCex呈典型的圆形或椭圆形膜层结构,直径为40-100 nm,并表达DC细胞的标志物CD83,CD86,CD80和HLA-DR.在DCex处理MSC后6h时,可在共聚焦显微镜下观察到进入到MSC胞质内的DCex,随着作用时间延长,细胞荧光强度增加.按组培养第7天,DCex实验组Runx2表达较对照组增高,差异有统计学显著性(P ＜0.05);MSC培养第14天,DCex组ALP含量OD值与对应蛋白比为2.22 ±0.27,显著高于阴性对照组(1.20±0.21) (P＜0.01),但低于标准诱导组(3.22±0.24) (P ＜0.05).结论:DCex可以促进MSC向成骨细胞分化,其具体机制仍需进一步研究证实.
본연구관찰인수돌상세포(dendritic cells,DC)래원적외비체(DC-derived exosome,DCex)대인골수간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSC)성골분화적영향.채용초속리심법종수돌상세포배양상청중획취DCex,응용전자현미경관찰DCex형태병통과류식세포술검측화감정기세포래원.취제3대MSC,설3조배양유도체계:①대조조:α-MEM기출배양액조;②실험조:α-MEM기출배양액+DCex(10 μg/ml)조;③α-MEM기출배양액+표준유도제조.채용형광실시정량PCR、경지당응효전영검측각조성골분화전록인자Runx2 mRNA적표체정황,병진행감성린산매(ALP)활성검측.령외,형광염료DiI표기DCex,응용공취초현미경관찰DCex진입MSC적과정.결과현시,재전자현미경하DCex정전형적원형혹타원형막층결구,직경위40-100 nm,병표체DC세포적표지물CD83,CD86,CD80화HLA-DR.재DCex처리MSC후6h시,가재공취초현미경하관찰도진입도MSC포질내적DCex,수착작용시간연장,세포형광강도증가.안조배양제7천,DCex실험조Runx2표체교대조조증고,차이유통계학현저성(P ＜0.05);MSC배양제14천,DCex조ALP함량OD치여대응단백비위2.22 ±0.27,현저고우음성대조조(1.20±0.21) (P＜0.01),단저우표준유도조(3.22±0.24) (P ＜0.05).결론:DCex가이촉진MSC향성골세포분화,기구체궤제잉수진일보연구증실.