CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)分泌的外泌体(exosome)免疫调节功能及支持血管形成能力.收集第4-6代BMMSC上清液提取外泌体,应用透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD9,bicinchoninic acid(BCA)方法定量检测外泌体分泌量;与正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC)作用72 h后用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PBMNC 分泌的γ-干扰素(IFN-γ);实时定量PCR检测外泌体内免疫相关microRNA表达;共聚焦显微镜观察外泌体与人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的作用方式,与HUVEC共培养后观察其网状结构形成;应用裸鼠体内试验检测外泌体对血管形成能力的作用.结果表明,正常人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体近似圆形,直径在40-160 nm之间,表达表面标志CD9,其分泌量与接种细胞数呈线性关系,可抑制PBMNC分泌IFN-γ(P ＜0.01),内含有免疫相关microRNA如miR301、miR22和miR-let-7a等,能促进HUVEC网状结构形成和血管形成(P＜0.01).结论:BMMSC分泌外泌体具有免疫调节功能与支持血管形成作用.
본연구지재탐토정상인골수간충질간세포(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)분비적외비체(exosome)면역조절공능급지지혈관형성능력.수집제4-6대BMMSC상청액제취외비체,응용투사전경관찰기형태,단백인적법검측기표면특이표지CD9,bicinchoninic acid(BCA)방법정량검측외비체분비량;여정상인외주혈단개핵세포(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC)작용72 h후용매련면역흡부시험(ELISA)법검측PBMNC 분비적γ-간우소(IFN-γ);실시정량PCR검측외비체내면역상관microRNA표체;공취초현미경관찰외비체여인제대정맥내피세포(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)적작용방식,여HUVEC공배양후관찰기망상결구형성;응용라서체내시험검측외비체대혈관형성능력적작용.결과표명,정상인골수간충질간세포분비적외비체근사원형,직경재40-160 nm지간,표체표면표지CD9,기분비량여접충세포수정선성관계,가억제PBMNC분비IFN-γ(P ＜0.01),내함유면역상관microRNA여miR301、miR22화miR-let-7a등,능촉진HUVEC망상결구형성화혈관형성(P＜0.01).결론:BMMSC분비외비체구유면역조절공능여지지혈관형성작용.