浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2014年
3期
319-326
,共8页
韩雪%董旭%蒋文学%黄鹏%张纬萍%唐淳
韓雪%董旭%蔣文學%黃鵬%張緯萍%唐淳
한설%동욱%장문학%황붕%장위평%당순
光谱法,荧光%转移酶类%NAD%酶抑制剂%药物评价,临床前
光譜法,熒光%轉移酶類%NAD%酶抑製劑%藥物評價,臨床前
광보법,형광%전이매류%NAD%매억제제%약물평개,림상전
Spectrometry,fluorescence%Transferases%NAD%Enzyme inhibitors%Drug evaluation,preclinical
目的:建立内源荧光检测筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂的方法.方法:以1,4-二马来酰亚胺基丁烷(BMB)交联G355 C/D393C双突变NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交联型NAMPT蛋白的自发荧光变化(280 nm激发波长,333 nm发射波长)检测化合物与蛋白的结合,以核磁共振方法体外检测化合物对NAMPT催化作用的影响,以MTT方法检测化合物对人肺癌A549细胞活性的影响.结果:FK866在0.1～1.0 μmol/L浓度范围内能浓度依赖地抑制野生型NAMPT自发荧光,但对交联型NAMPT的自发荧光没有影响.迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对两种蛋白自发荧光的抑制率无显著差异.FK866能够显著抑制NAMPT的催化作用,但迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对NAMPT的催化作用无抑制作用.FK866显著抑制A549细胞的活性,而迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对A549细胞活性无抑制作用.结论:基于野生型和交联型NAMPT蛋白的内源性荧光检测法可以筛选与NAMPT蛋白结合的化合物,并分析化合物是否结合在NAMPT的催化活性部位,迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸可结合在NAMPT催化活性位点以外的部位.
目的:建立內源熒光檢測篩選煙酰胺燐痠覈糖轉移酶(NAMPT)抑製劑的方法.方法:以1,4-二馬來酰亞胺基丁烷(BMB)交聯G355 C/D393C雙突變NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交聯型NAMPT蛋白的自髮熒光變化(280 nm激髮波長,333 nm髮射波長)檢測化閤物與蛋白的結閤,以覈磁共振方法體外檢測化閤物對NAMPT催化作用的影響,以MTT方法檢測化閤物對人肺癌A549細胞活性的影響.結果:FK866在0.1～1.0 μmol/L濃度範圍內能濃度依賴地抑製野生型NAMPT自髮熒光,但對交聯型NAMPT的自髮熒光沒有影響.迷迭香痠、洋薊素、1,3二咖啡奎寧痠對兩種蛋白自髮熒光的抑製率無顯著差異.FK866能夠顯著抑製NAMPT的催化作用,但迷迭香痠、洋薊素、1,3二咖啡奎寧痠對NAMPT的催化作用無抑製作用.FK866顯著抑製A549細胞的活性,而迷迭香痠、洋薊素、1,3二咖啡奎寧痠對A549細胞活性無抑製作用.結論:基于野生型和交聯型NAMPT蛋白的內源性熒光檢測法可以篩選與NAMPT蛋白結閤的化閤物,併分析化閤物是否結閤在NAMPT的催化活性部位,迷迭香痠、洋薊素、1,3二咖啡奎寧痠可結閤在NAMPT催化活性位點以外的部位.
목적:건립내원형광검측사선연선알린산핵당전이매(NAMPT)억제제적방법.방법:이1,4-이마래선아알기정완(BMB)교련G355 C/D393C쌍돌변NAMPT,봉도기최화활성중심,이야생형급교련형NAMPT단백적자발형광변화(280 nm격발파장,333 nm발사파장)검측화합물여단백적결합,이핵자공진방법체외검측화합물대NAMPT최화작용적영향,이MTT방법검측화합물대인폐암A549세포활성적영향.결과:FK866재0.1～1.0 μmol/L농도범위내능농도의뢰지억제야생형NAMPT자발형광,단대교련형NAMPT적자발형광몰유영향.미질향산、양계소、1,3이가배규저산대량충단백자발형광적억제솔무현저차이.FK866능구현저억제NAMPT적최화작용,단미질향산、양계소、1,3이가배규저산대NAMPT적최화작용무억제작용.FK866현저억제A549세포적활성,이미질향산、양계소、1,3이가배규저산대A549세포활성무억제작용.결론:기우야생형화교련형NAMPT단백적내원성형광검측법가이사선여NAMPT단백결합적화합물,병분석화합물시부결합재NAMPT적최화활성부위,미질향산、양계소、1,3이가배규저산가결합재NAMPT최화활성위점이외적부위.
