中国药事
中國藥事
중국약사
CHINESE PHARMACEUTICAL AFFAIRS
2014年
6期
601-606
,共6页
乐伟%彭璐佳%史权威%葛艳华%刘荷中
樂偉%彭璐佳%史權威%葛豔華%劉荷中
악위%팽로가%사권위%갈염화%류하중
重组人神经生长因子%CHO细胞%表达%生物活性
重組人神經生長因子%CHO細胞%錶達%生物活性
중조인신경생장인자%CHO세포%표체%생물활성
目的 利用中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞真核表达系统,获得高产的人神经生长因子(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)表达细胞株并对其分泌的rhNGF生物学活性进行评价.方法 设计、合成并构建了携带rhNGF目的基因的GS-DHFR双基因筛选表达载体pDG2.0/NGF.经脂质体转染法将其导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO DG44)中,经氨甲喋呤(MTX)和蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)两种药物加压筛选和克隆化获得目的细胞株.经过阳离子交换和分子筛纯化,获得rhNGF制品.最后,利用小鼠神经生长因子生物学活性参比品评估纯化制品的生物学活性.结果 通过基因合成、栽体构建、细胞转染、加压筛选和克隆化等步骤,我们得到了高表达rhNGF的CHO-DG44单克隆细胞株.经过2步法纯化获得了纯度大于98％的精制rhNGF制品.生物学活性分析表明,与市售小鼠NGF产品相比较,我们所表达的rhNGF具有更好的生物学活性.结论 成功实现了rhNGF的高水平和高活性表达,为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了坚实基础.
目的 利用中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)細胞真覈錶達繫統,穫得高產的人神經生長因子(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)錶達細胞株併對其分泌的rhNGF生物學活性進行評價.方法 設計、閤成併構建瞭攜帶rhNGF目的基因的GS-DHFR雙基因篩選錶達載體pDG2.0/NGF.經脂質體轉染法將其導入二氫葉痠還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞(CHO DG44)中,經氨甲喋呤(MTX)和蛋氨痠亞氨基代砜(MSX)兩種藥物加壓篩選和剋隆化穫得目的細胞株.經過暘離子交換和分子篩純化,穫得rhNGF製品.最後,利用小鼠神經生長因子生物學活性參比品評估純化製品的生物學活性.結果 通過基因閤成、栽體構建、細胞轉染、加壓篩選和剋隆化等步驟,我們得到瞭高錶達rhNGF的CHO-DG44單剋隆細胞株.經過2步法純化穫得瞭純度大于98％的精製rhNGF製品.生物學活性分析錶明,與市售小鼠NGF產品相比較,我們所錶達的rhNGF具有更好的生物學活性.結論 成功實現瞭rhNGF的高水平和高活性錶達,為大規模工業化生產重組人神經生長因子奠定瞭堅實基礎.
목적 이용중국창서란소(Chinese Hamster Ovary,CHO)세포진핵표체계통,획득고산적인신경생장인자(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)표체세포주병대기분비적rhNGF생물학활성진행평개.방법 설계、합성병구건료휴대rhNGF목적기인적GS-DHFR쌍기인사선표체재체pDG2.0/NGF.경지질체전염법장기도입이경협산환원매결함형중국창서란소세포(CHO DG44)중,경안갑첩령(MTX)화단안산아안기대풍(MSX)량충약물가압사선화극륭화획득목적세포주.경과양리자교환화분자사순화,획득rhNGF제품.최후,이용소서신경생장인자생물학활성삼비품평고순화제품적생물학활성.결과 통과기인합성、재체구건、세포전염、가압사선화극륭화등보취,아문득도료고표체rhNGF적CHO-DG44단극륭세포주.경과2보법순화획득료순도대우98％적정제rhNGF제품.생물학활성분석표명,여시수소서NGF산품상비교,아문소표체적rhNGF구유경호적생물학활성.결론 성공실현료rhNGF적고수평화고활성표체,위대규모공업화생산중조인신경생장인자전정료견실기출.
