解剖学杂志
解剖學雜誌
해부학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANATOMY
2014年
3期
293-295,303,封2
,共5页
王毓蓉%吴波%孙海梅%周德山
王毓蓉%吳波%孫海梅%週德山
왕육용%오파%손해매%주덕산
Keap1%细胞骨架%丝状肌动蛋白%细胞运动
Keap1%細胞骨架%絲狀肌動蛋白%細胞運動
Keap1%세포골가%사상기동단백%세포운동
Kelch-like ECH-associated protein 1%cytoskeleton%filament actin%cell motility
目的:探讨抑癌基因Keap1在细胞运动中的作用及其调控机制.方法:构建真核表达载体pIRES-EGFP-Keap1,应用Lipofectamine 2000脂质体转染COS-7和A549细胞并以其作为实验组,以其空载pIRES-EGFP转染细胞组为对照组,未转染组为正常组.免疫印迹检测两组细胞Keap1蛋白表达水平;采用划痕实验观察细胞迁移能力,免疫荧光显色显示细胞骨架F-actin的解聚与重组.结果:已知COS-7细胞不表达Keap1,转染pIRES-EGFP-Keap1后,免疫印迹显示Keap1蛋白表达明显增加,提示载体构建和转染成功.细胞迁移实验显示Keap1过表达使COS-7细胞迁移能力明显下降,过表达Keap1的COS-7和A549细胞内F-actin纤维束增多、增粗、增长,交错排列横穿整个胞质;对照组束状F-actin纤维较少且短,在细胞质散在分布.结论:Keap1过表达能够促进细胞内应力纤维形成,增加细胞骨架稳定性,发挥抑制细胞运动的作用.
目的:探討抑癌基因Keap1在細胞運動中的作用及其調控機製.方法:構建真覈錶達載體pIRES-EGFP-Keap1,應用Lipofectamine 2000脂質體轉染COS-7和A549細胞併以其作為實驗組,以其空載pIRES-EGFP轉染細胞組為對照組,未轉染組為正常組.免疫印跡檢測兩組細胞Keap1蛋白錶達水平;採用劃痕實驗觀察細胞遷移能力,免疫熒光顯色顯示細胞骨架F-actin的解聚與重組.結果:已知COS-7細胞不錶達Keap1,轉染pIRES-EGFP-Keap1後,免疫印跡顯示Keap1蛋白錶達明顯增加,提示載體構建和轉染成功.細胞遷移實驗顯示Keap1過錶達使COS-7細胞遷移能力明顯下降,過錶達Keap1的COS-7和A549細胞內F-actin纖維束增多、增粗、增長,交錯排列橫穿整箇胞質;對照組束狀F-actin纖維較少且短,在細胞質散在分佈.結論:Keap1過錶達能夠促進細胞內應力纖維形成,增加細胞骨架穩定性,髮揮抑製細胞運動的作用.
목적:탐토억암기인Keap1재세포운동중적작용급기조공궤제.방법:구건진핵표체재체pIRES-EGFP-Keap1,응용Lipofectamine 2000지질체전염COS-7화A549세포병이기작위실험조,이기공재pIRES-EGFP전염세포조위대조조,미전염조위정상조.면역인적검측량조세포Keap1단백표체수평;채용화흔실험관찰세포천이능력,면역형광현색현시세포골가F-actin적해취여중조.결과:이지COS-7세포불표체Keap1,전염pIRES-EGFP-Keap1후,면역인적현시Keap1단백표체명현증가,제시재체구건화전염성공.세포천이실험현시Keap1과표체사COS-7세포천이능력명현하강,과표체Keap1적COS-7화A549세포내F-actin섬유속증다、증조、증장,교착배렬횡천정개포질;대조조속상F-actin섬유교소차단,재세포질산재분포.결론:Keap1과표체능구촉진세포내응력섬유형성,증가세포골가은정성,발휘억제세포운동적작용.
