工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2014年
3期
13-18
,共6页
王磊%张荣珍%徐岩%范文来%李尧慧%梁宏博
王磊%張榮珍%徐巖%範文來%李堯慧%樑宏博
왕뢰%장영진%서암%범문래%리요혜%량굉박
(R)-羰基还原酶%分泌表达%甘氨酸%大肠杆菌%近平滑假丝酵母
(R)-羰基還原酶%分泌錶達%甘氨痠%大腸桿菌%近平滑假絲酵母
(R)-탄기환원매%분비표체%감안산%대장간균%근평활가사효모
(R)-carbonyl reductase%secretory expression%glycine%Escherichia coli%Candida parapsilosis
克隆了近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)(R)-羰基还原酶基因rcr,构建胞外表达工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,实现了(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中高效外泌表达,周质空间和发酵液酶的比活力分别达0.68 U/mg和0.26 U/mg,与大肠杆菌的胞内体系重组酶相比,酶的比活力提高了近两倍.为了更好地促进该重组酶的外分泌于大肠杆菌细胞外,通过添加温和型化学渗透剂甘氨酸,改善细胞壁的透性,(R)-羰基还原酶的活力提高至1.99 U,与添加甘氨酸前相比,酶活力提高了12.4倍,比活提高了4.3倍.浓缩后的发酵液催化2-羟基苯乙酮,产生(R)-苯基乙二醇,产率为88.1％,e.e.值为93.9％.与胞内重组酶相比,产率和光学纯度分别提高了44.4％和15.9％.本研究通过构建(R)-羰基还原酶的大肠杆菌分泌表达体系,大幅度提高了(R)-羰基还原酶的比活和生物转化手性醇的效率.
剋隆瞭近平滑假絲酵母(Candida parapsilosis)(R)-羰基還原酶基因rcr,構建胞外錶達工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,實現瞭(R)-羰基還原酶在大腸桿菌中高效外泌錶達,週質空間和髮酵液酶的比活力分彆達0.68 U/mg和0.26 U/mg,與大腸桿菌的胞內體繫重組酶相比,酶的比活力提高瞭近兩倍.為瞭更好地促進該重組酶的外分泌于大腸桿菌細胞外,通過添加溫和型化學滲透劑甘氨痠,改善細胞壁的透性,(R)-羰基還原酶的活力提高至1.99 U,與添加甘氨痠前相比,酶活力提高瞭12.4倍,比活提高瞭4.3倍.濃縮後的髮酵液催化2-羥基苯乙酮,產生(R)-苯基乙二醇,產率為88.1％,e.e.值為93.9％.與胞內重組酶相比,產率和光學純度分彆提高瞭44.4％和15.9％.本研究通過構建(R)-羰基還原酶的大腸桿菌分泌錶達體繫,大幅度提高瞭(R)-羰基還原酶的比活和生物轉化手性醇的效率.
극륭료근평활가사효모(Candida parapsilosis)(R)-탄기환원매기인rcr,구건포외표체공정균Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,실현료(R)-탄기환원매재대장간균중고효외비표체,주질공간화발효액매적비활력분별체0.68 U/mg화0.26 U/mg,여대장간균적포내체계중조매상비,매적비활력제고료근량배.위료경호지촉진해중조매적외분비우대장간균세포외,통과첨가온화형화학삼투제감안산,개선세포벽적투성,(R)-탄기환원매적활력제고지1.99 U,여첨가감안산전상비,매활력제고료12.4배,비활제고료4.3배.농축후적발효액최화2-간기분을동,산생(R)-분기을이순,산솔위88.1％,e.e.치위93.9％.여포내중조매상비,산솔화광학순도분별제고료44.4％화15.9％.본연구통과구건(R)-탄기환원매적대장간균분비표체체계,대폭도제고료(R)-탄기환원매적비활화생물전화수성순적효솔.
